杨长俊 吴莉莉

甲状腺微小乳头状癌冷冻切片诊断和免疫组化表达及意义

杨长俊 吴莉莉

目的探讨结节性甲状腺肿合并甲状腺微小乳头状癌的冷冻切片诊断及半乳糖凝集素-3(Galectin-3)、间皮瘤相关抗体-1(HBME-1)、细胞角蛋白19(CK19)、CD56的表达及意义。方法对40例冷冻切片诊断为甲状腺微小乳头状癌进行光镜观察并采用免疫组化EnVision法检测Galectin-3、HBME-1、CK19、CD56的表达水平。结果40例均为甲状腺微小乳头状癌, 光镜下主要组织学特征为毛玻璃样核、核沟、纤维性间质、核内包涵体及砂砾体。免疫组化Galectin-3、HBME-1 、CK19在甲状腺微小乳头状癌中均呈阳性表达, 在结节性甲状腺肿中呈阴性或个别弱阳性表达。CD56在甲状腺微小乳头状癌6例呈轻度着色,34例呈阴性表达, 在周围结节性甲状腺肿组织均呈阳性表达。结论甲状腺微小乳头状癌的诊断主要依据组织病理学, Galectin-3、HBME-1、CK19及CD56的联合检测有助于提高甲状腺微小乳头状癌的诊断准确率。

甲状腺微小乳头状癌；冷冻切片；半乳糖凝集素-3；间皮瘤相关抗体-1；细胞角蛋白19；CD56；免疫组化

甲状腺微小乳头状癌是指直径≤1 cm的甲状腺乳头状癌。由于肿瘤微小, 常与结节性甲状腺肿并发, 临床表现与形态学有时并不典型, 如不仔细检查往往造成临床及病理的漏诊, 特别是在冷冻切片检查时。为了进一步认识该疾病、减少误诊, 收集信阳市中心医院病理科2011～2013年冷冻切片检查诊断甲状腺微小乳头状癌40例, 并经石蜡切片和免疫组化进一步证实, 总结其诊断及鉴别诊断要点, 分析Galectin-3、HBME-1 、CK19及CD56的表达水平及其在鉴别诊断中的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 信阳市中心医院2011～2013年甲状腺冰冻切片病理学检查病例1195例, 诊断甲状腺微小乳头状癌40例。其中男7例, 女33例, 男女之比1∶5。年龄23～70岁, 平均年龄45岁。

1.2 方法 组织标本均为手术切除后立即送检的新鲜标本,按间隔0.2～0.5 cm切开, 肉眼观察可疑病灶以最大面取材, 有钙化取周围软组织。采用LEICA CM1950型恒冷式冷冻切片机, -22℃以下切片, 切片厚5 μm, HE染色。对冷冻切片后组织及剩余组织用4％中性甲醛固定, 石蜡包埋, 切片厚4 μm, HE染色。免疫组化染色用EnVision法, 抗体Galectin-3、HBME-1、CK19、CD56及试剂盒均购自DAKO公司。每种抗体均设阳性及阴性对照, 操作用Roche公司BenchMark XT全自动免疫组化机。

2 结果

2.1 组织病理学特征 甲状腺微小乳头状癌肿块大小0.2～1 cm,无包膜。切面灰白色, 部分呈放射状和纤维瘢痕样。组织学上在结节性甲状腺肿组织中可见微小病灶,12例主要呈现乳头状结构, 核呈毛玻璃样核, 可见核沟、核内包涵体和纤维瘢痕。23例主要呈腺样结构, 核呈毛玻璃样核, 可见核沟、核内包涵体和纤维瘢痕。5例主要呈乳头状或腺样结构, 无明显核的特征, 无纤维瘢痕形成。

2.2 免疫组化 在甲状腺微小癌中36例Galectin-3呈中-重度阳性着色(见图1),4例轻度着色, 着色部位位于胞质,阳性率100％；在结节性甲状腺中全部阴性。33例HBME-1呈中-重度阳性着色(见图2),7例轻度着色, 着色部位位于胞膜, 阳性率100％；在结节性甲状腺肿中全部阴性。40例CK19呈中-重度阳性着色(见图3), 着色部位位于胞膜及胞质, 阳性率100％；在结节性甲状腺肿中7例呈轻度着色。甲状腺微小乳头状癌中6例CD56呈轻度着色, 着色部位位于胞膜, 阳性率15％, 且着色主要位于肿瘤组织与正常甲状腺组织交界处；在结节性甲状腺肿中CD56全部着色, 阳性率100％。

图1 甲状腺微小乳头状癌中Galectin-3(+), EnVision法

图2 甲状腺微小乳头状癌中HBME-1(+), EnVision法

图3 甲状腺微小乳头状癌中CK19(+), EnVision法

3 讨论

术中快速冷冻切片检查的诊断结果直接影响临床的手术方案, 对外科医生来说越来越重要。但是由于冷冻切片自身的局限性, 与石蜡切片相比, 组织结构欠清晰, 细胞形态变异大, 甚至会出现人工假象, 由于甲状腺微小癌体积小, 冷冻切片诊断相对困难。为了提高甲状腺微小癌冷冻切片诊断的准确率, 需要：①大体检查要细心, 需按2～3 mm书页状切开, 对灰白结节、纤维瘢痕样组织要全面取材。②必须掌握乳头状癌的诊断标准, 组织结构:a.呈浸润性生长；b.间质常硬化；c.多分枝细长乳头;d.常有滤泡, 呈扁圆形, 此时乳头结构则分枝减少、滤泡含深染胶质；e.出现砂粒体, 是乳头状癌特征性标志, 有时仅见砂粒体未见乳头结构, 但多取材多切片时就会找到乳头结构。同时应注意与钙化的胶质鉴别,砂粒体位于间质中, 而钙化胶质位于腺腔内。细胞形态:a.形状多样；b.胞浆嗜酸或透明；c.鳞化常见；d.特征性核：密集、卵圆、毛玻璃状、核沟、核内假包涵体、细小核仁[1］。上述特点并不一定每例都同时具备, 但却是诊断乳头状癌所必备。③进行石蜡切片的对比观察以及免疫组化染色的进一步证实。

Galectin-3是一种结合β-半乳糖苷酶的外源性凝集素, 细胞膜表面的Galectin-3与同型细胞间的粘附有关, Galectin-3水平的下调表示了各种肿瘤的侵袭与转移的活跃程度, 是甲状腺微小乳头状癌诊断中的一个重要指标。Laco等[2］研究显示22例甲状腺微小乳头状癌胖有19例是Galectin-3表达阳性, 本研究结果40例甲状腺微小乳头状癌中36例Galectin-3呈中-重度阳性着色,4例轻度着色, 着色部位位于胞质, 阳性率100％；在结节性甲状腺肿中全部阴性, 与Laco等基本一致。HBME-1是间皮细胞微绒毛表面特异性标记物, 在肿瘤血管的形成、肿瘤的生长以及肿瘤的转移中发挥重要作用。国外一项研究表明HBME-1在甲状腺乳头状癌中表达阳性率100％[3］。本研究结果40例甲状腺微小乳头状癌中33例HBME-1呈中-重度阳性着色,7例轻度着色, 阳性率100％；在结节性甲状腺肿中全部阴性。与文献报道的结果一致。CK19是一种低分子量的角蛋白, 主要标记各种单层上皮。Laco等研究显示22例甲状腺微小乳头状癌中有13例CK19阳性, 阳性率59％。本研究结果40例甲状腺微小乳头状癌中40例CK19呈中-重度阳性着色, 阳性率100％；在结节性甲状腺肿中有7例呈轻度着色。CD56是一种神经粘附分子, 正常表达于神经元、星形细胞、雪旺细胞、肌管和自然杀伤细胞[4］, 可影响肿瘤细胞的迁移。国外研究结果表明, CD56在所有乳头状癌病例中均呈阴性表达, 在良性甲状腺滤泡上皮持续性阳性表达[5］。本研究结果40例甲状腺微小乳头状癌中6例CD56呈轻度着色,34例CD56呈阴性表达, 阳性率15％。

总之, 一些甲状腺微小乳头状癌仅凭冷冻切片检查诊断有一定困难。进行石蜡切片的对比观察以及联合4种抗体免疫组化染色对甲状腺微小乳头状癌具有重要意义。

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Freezing microtome section diagnosis and immunohistochemical expression of papillary thyroid microcarcinoma and its significance

YANG Chang-jun, WU Li-li. Department of Pathology, Xinyang City Central Hospital, Xinyang464000, China

ObjectiveTo explore the freezing microtome section diagnosis of nodular goiter complicated with papillary thyroid microcarcinoma and the expression and significance of Galectin-3, human bone marrow endothelial cell-1 (HBME-1), cytokeratin19 (CK19) and CD56. Methods A total of40 diagnosed cases as papillary thyroid microcarcinoma by freezing microtome section were observed by light microscope, and the levels of Galectin-3, HBME-1, CK19 and CD56were detected by immunohistochemical EnVision method.ResultsAll the cases were papillary thyroid microcarcinoma. Under the light microscope, the main histopathologic features were ground glasslike nuclear, groove, fibrous stromal reactions, nuclear pseudoinclusion and psammoma bodies. The positive staining for Galectin-3, HBME-1 and CK19 was observed in nodular goiter microcarcinoma, but they were negative or mild expression in nodular goiter. There were6 cases with papillary thyroid microcarcinoma showing mild staining for CD56and34 cases revealed negative expression. In the nodular goiter, all cases showed positive straining.ConclusionDiagnosis of papillary thyroid microcarcinoma is mainly based on tissue pathology. The combined detection of Galectin-3, HBME-1, CK19 and CD56will improve the accuracy of diagnosing papillary thyroid microcarcinoma.

Papillary thyroid microcarcinoma; Freezing microtome section; Galectin-3; Human bone marrow endothelial cell-1; Cytokeratin19; CD56；Immunohistochemistry

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.02.003

2014-10-28］

464000 信阳市中心医院病理科