张　婷

(安徽省淮北市食品药品检验中心，安徽 淮北　235000)



治咳枇杷露的质量标准研究

张婷

(安徽省淮北市食品药品检验中心，安徽 淮北235000)

摘要:目的对治咳枇杷露的质量标准进行研究，提高质量控制水平。方法采用薄层色谱法对枇杷叶、薄荷脑、桔梗进行鉴别，采用气相色谱法测定薄荷脑的含量。结果枇杷叶、薄荷脑、桔梗的薄层色谱斑点清晰，分离度好，专属性强，阴性无干扰；薄荷脑的线性范围为0.400 8～2.405 0 μg(r=0.999 9), 平均加样回收率为99.4%(n=6)，RSD=0.19%。结论优化后的质量标准方法易行、准确可靠, 可用于治咳枇杷露的质量控制。

关键词:治咳枇杷露；薄层色谱法；气相色谱法

治咳枇杷露收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册，由枇杷叶、百部、前胡、桔梗、桑白皮、薄荷脑制备而成。功能与主治为清肺热、止咳、祛痰，用于风热侵肺引起的口干作渴，咳逆痰多及支气管炎咳嗽，兼治儿童伤风呃逆，咳嗽痰盛[1]。原质量标准比较简单，只有相对密度、pH值、装量等相应的检查项，无薄层色谱鉴别和含量测定项。为了提高治咳枇杷露质量标准控制水平，分别对处方中的枇杷叶、薄荷脑和桔梗的薄层色谱鉴别方法进行研究，同时采用气相色谱法测定薄荷脑的含量。

1仪器与试药

1.1仪器AGILENT 7890A气相色谱仪，FID检测器，岛津Rtx-WAX色谱柱，Mettler AE-240电子分析天平。

1.2试药薄荷脑对照品(批号：110728-200506)、萘对照品(批号：111673-200803)、枇杷叶对照药材(批号：121261-200502)、桔梗对照药材(批号：121028-200507)，均购于中国药品生物制品检定所；治咳枇杷露(安徽辉克药业有限公司，批号：120829、130112、121202)，硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂)，D101型大孔吸附树脂(天津制胶厂)，其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1枇杷叶TLC鉴别

2.1.1供试品溶液的制备取本品20 mL，加水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水3 mL使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5 cm，柱高为8 cm)，以水50 mL洗脱，弃去水洗脱液，再用稀乙醇洗脱至洗脱液无色，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

2.1.2对照药材溶液的制备取枇杷叶对照药材2 g，加水100 mL，煎煮1 h，滤过，滤液同“2.1.1”项方法制成对照药材溶液。

2.1.3阴性对照溶液的制备按处方比例取除枇杷叶外其余药材，按制剂工艺制成阴性空白样品，按“2.1.1”项方法制成阴性对照溶液。

2.1.4实验方法吸取上述三种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷—乙酸乙酯—冰醋酸(8∶4∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，枇杷叶阴性色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上无斑点，结果见图1。

2.2薄荷脑TLC鉴别[2-3]

2.2.1供试品溶液的制备取本品15 mL，加石油醚(30～60℃)提取2次，每次15 mL，合并石油醚液，低温浓缩至1 mL，作为供试品溶液。

2.2.2对照品溶液的制备取薄荷脑对照品，加石油醚(30～60℃)制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3阴性对照溶液的制备按处方比例取除薄荷脑外其余药材，按制剂工艺制成阴性空白样品，按“2.2.1”项方法制成阴性对照溶液。

2.2.4实验方法吸取上述三种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷—乙酸乙酯(17 ∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，薄荷脑阴性色谱中，在与对照品色谱相应的位置上无斑点，结果见图2。

注：1.枇杷叶对照药材；2~4.样品；5.缺枇杷叶阴性样品。

注：1.薄荷脑对照品；2~4.样品；5.缺薄荷脑阴性样品。

2.3桔梗TLC鉴别[4-6]

2.3.1供试品溶液的制备取本品15 mL，加7%硫酸乙醇20 mL及水30 mL，加热回流2 h，放冷，用三氯甲烷振摇提取3次，每次40 mL，合并三氯甲烷液，加水洗涤2次，每次40 mL，弃去水层，三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

2.3.2对照药材溶液的制备取桔梗对照药材1 g，加水100 mL，煎煮1 h，滤过，滤液同“2.3.1”项方法制成对照药材溶液。

2.3.3阴性对照溶液的制备按处方比例取除桔梗外其余药材，按制剂工艺制成阴性空白样品，按“2.3.1”项方法制成阴性对照溶液。

2.3.4实验方法吸取上述三种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙醚-甲酸(10 ∶9 ∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，桔梗阴性色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上无斑点，结果见图3。

注：1.桔梗对照药材；2~4.样品；5.缺桔梗阴性样品。

2.4 薄荷脑含量测定

2.4.1色谱条件毛细管色谱柱：Rtx-WAX色谱柱(柱长30 m，内径0.25 mm，膜厚0.25 μm)，柱温：140℃；检测器：FID，检测器温度：260℃；进样口温度：260℃，分流比为5 ∶1；载气：氮气，流速为1.0 mL·min-1；氢气流速：40 mL·min-1；空气流速为400 mL·min-1；氮气尾吹，流速为30 mL·min-1；进样量：2 μL。[6-7]

2.4.2内标溶液的制备精密称取萘对照品160.73 mg，置25 mL量瓶中，加环己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液。

2.4.3对照品储备液的制备精密称取薄荷脑对照品100.21 mg，置50 mL量瓶中，加环己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液(每1 mL含2.004 2 mg薄荷脑)。

2.4.4供试品溶液的制备[7]精密量取本品50 mL，置500 mL圆底烧瓶中，加水250 mL，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，加环己烷3 mL，连接回流冷凝管，加热保持微沸3 h，放冷，将测定器中的液体移至分液漏斗中，冷凝管及挥发油测定管内壁用环己烷少量洗涤，并入分液漏斗中，分取环己烷液，水液再用环己烷提取2次，每次3 mL，用铺有无水硫酸钠0.5 g的漏斗滤过，合并环己烷液，置25 mL量瓶中，精密加入内标溶液1 mL，加环己烷至刻度，摇匀，即得。

2.4.5阴性对照溶液的制备按处方比例取除薄荷脑外其余药材，按制剂工艺制成阴性空白样品，按“2.4.4”项方法制成阴性对照溶液。

2.4.6专属性考察按照“2.4.1”项色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各2 μL,分别注入气相色谱仪，结果见图4。表明其他药味不干扰供试品溶液中薄荷脑的测定。

混合对照品样品阴性对照

图4治咳枇杷露 GC 色谱图

注：1.薄荷脑；2.萘。

2.4.7线性关系考察分别精密吸取对照品储备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，置10 mL量瓶中，再分别精密加入内标溶液1 mL，用环己烷定容至刻度，摇匀，精密吸取2 μL注入气相色谱仪，按照“2.4.1”项色谱条件测定，记录峰面积。以进样量(μg)为横坐标，薄荷脑和内标物峰面积的比值为纵坐标，经线性回归，得回归方程为：Y=0.607 5X-0.006 2(r=0.999 9)，结果表明，薄荷脑在0.400 8～2.405 0 μg范围内呈良好的线性关系。

2.4.8精密度试验精密吸取同一对照品溶液，在“2.4.1”项色谱条件下重复进样5次，以薄荷脑峰面积与内标物峰面积的比值计算，RSD为0.21%，表明本法精密度良好。

2.4.9重复性试验取同一供试品(批号为120829)5份，按“2.4.4”项方法制成供试品溶液，在“2.4.1”项色谱条件下测定含量，薄荷脑的含量为0.17 g·L-1，RSD为0.09%，表明本法重复性良好。

2.4.10稳定性试验取制备好的供试品溶液(批号为120829)，在“2.4.1”项色谱条件下，每2 h进样一次，以薄荷脑峰面积与内标物峰面积的比值计算，RSD为0.15%，表明本品在18 h内稳定性良好。

2.4.11回收率试验精密量取已知薄荷脑含量为0.17 g·L-1的供试品(批号为120829)6份，每份25 mL，置圆底烧瓶中，再分别精密加入薄荷脑含量为2.209 6 g·L-1的对照品溶液2.0 mL(精密称取薄荷脑对照品55.24 mg，置25 mL量瓶中，加环己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即得)，按“2.4.4”项下方法制备供试品溶液，在“2.4.1”项色谱条件下测定，平均回收率99.4%，RSD为0.19%，结果见表1。

表1　加样回收率试验结果

2.4.12样品含量测定取不同批号样品三批(批号分别为120829、130112、121202)，按“2.4.4”项下方法制备供试品溶液，在“2.4.1”项色谱条件下测定并计算薄荷脑的含量，结果分别为0.17、0.19、0.17 g·L-1。

3讨论

3.1枇杷叶薄层色谱鉴别 枇杷叶的薄层色谱鉴别参照了有关文献报道[7-8]，曾以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(12 ∶2 ∶0.2)为展开剂，展开后用10%硫酸乙醇溶液显色、加热，结果供试品和对照药材斑点均不清晰，展距不理想，采用本文方法，以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(8∶4∶0.1)为展开剂，展开后用5%香草醛硫酸溶液显色、加热，效果满意。

3.2内标物的选择薄荷脑属于易挥发性物质，为了抵消进样时挥发所带来的误差，故采用内标法测定薄荷脑的含量。经查阅有关文献[9-10]及参考药典[7]，选用萘为内标物，且萘在该色谱条件下保留时间适中，峰形较好，分离度良好，而且阴性对照无干扰，使结果更加准确可靠。

3.3含量测定提取时间的确定试验中曾取同一批样品，照含量测定方法分别提取2、3、4 h，测得2 h含量结果偏低，3 h与4 h含量结果基本一致，说明样品在3 h时已基本提取完全，故确定提取时间为3 h。

3.4柱温的选择曾参照药典[7]将柱温设为110℃，在其余色谱条件不变的情况下，薄荷脑和内标物的保留时间过长，且峰形不理想，将柱温改为140℃后[11-12]，效果满意，最终确定柱温为140℃。

4结论

本文所建立的枇杷叶、薄荷脑、桔梗薄层鉴别方法，提取简便，斑点清晰，阴性无干扰；薄荷脑含量测定方法经方法学考察，结果表明线性关系、精密度、重复性、稳定性及回收率均良好，方法可行；与原标准相比提高了治咳枇杷露的质量控制水平。

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◇临床医学◇

Study on the quality standard of Zhikepipa Mixture

ZHANG Ting

(HuaibeiFoodandDrugInspectionCenter，Huaibei，Anhui235000，China)

Abstract：ObjectiveTo study the quality standard of Zhikepipa Mixture and improve the quality control level．MethodsFolium eriobotryae，menthol and radix platycodonis in Zhikepipa Mixture were identified by TLC．The content of menthol was determined by GC． ResultsTLC spots were clear with high resolution and strong specialization and the negative control showed no interference．The linear range of menthol was 0.400 8～2.405 0 μg (r=0.999 9) and the average recovery was 99.4 % with RSD of 0.19 %(n=6)．ConclusionThe improved quality standard is simple，accurate and can be used for the quality control of Zhikepipa Mixture．

Key words：Zhikepipa Mixture；TLC；GC

(收稿日期：2014-04-08，修回日期：2014-09-12)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.02.020