叶晓玲，刘妍，陈容娟，许智慧，李晓东，叶海燕，唐振祥，程书权，徐东平

核苷(酸)类似物(NAs)具有强效抑制乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)、改善肝脏功能、延缓肝脏疾病进展以及口服方便、副反应小等特点，已广泛应用于慢性乙肝(chronic hepatitis B，CHB)的治疗，然而长期用药引起的耐药问题为临床乙肝防治带来了新的挑战。阿德福韦酯(ADV)是第一种应用于临床的核苷酸类药物，因其对HBV野生株和核苷类药物拉米夫定(LAM)耐药株均有较强的抗病毒作用而被广泛用于临床CHB患者的治疗，但长期应用仍具有较高的耐药率(5年耐药率为29%)。经典的ADV耐药变异为HBV反转录酶(RT)区rtN236T和rtA181V变异[1-2]。近年有研究报道HBV rtI233V位点变异可引起ADV耐药，但也有报道该变异仍对ADV敏感[3-9]。本研究从临床大样本患者入手，分析rt I233V变异的发生频率，并重点分析其中2例慢性HBV患者rtI233V变异的演变过程，总结变异株与野生株的表型耐药特点，明确rtI233V位点变异的病毒学特点及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 研究对象 2010年7月－2013年8月解放军302医院收治的慢性HBV感染者9830例，均接受不同的NAs治疗。诊断标准符合《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》[10]，常规检查项目由解放军302医院临床检验中心完成，无重叠或混合感染，血清冻存于–20℃。

1.2 主要试剂 病毒DNA-OUT提取试剂盒(北京天恩泽公司)，pGEM-Teasy载体(Prom ega公司，美国)，XbaⅠ/SphⅠ内切酶及T4DNA连接酶(TaKaRa公司，日本)，p TriEx-HBV(C)1.1倍载体(法国里昂大学Zou lim教授惠赠)，X-trem eGENE HD 转染试剂(Roche公司，德国)，胎牛血清、DMEM培养基(Gib co公司，美国)，荧光定量PCR试剂盒(上海复星公司)。引物合成和克隆测序均由北京天一辉远公司完成。

1.3 方法

1.3.1 HBV RT区……