罗晚媛 唐莹 何本夫

血浆EBV-DNA表达水平与鼻咽癌分期的相关性分析

罗晚媛 唐莹 何本夫

目的研究血浆EBV-DNA表达水平与鼻咽癌分期的相关性。方法选择了55例鼻咽癌患者，同时选取同期住院治疗的55例其他类型的肿瘤患者作为其他类肿瘤对照组及55例体检健康者为健康对照组，比较分析鼻咽癌组与对照组患者的血浆EBV-DNA阳性检出情况，鼻咽癌组患者与对照组血浆EBV-DNA浓度及血浆EBV-DNA阳性的鼻咽患者早期和晚期的拷贝数。结果鼻咽癌组血浆EBV-DNA检出阳性率为72．7%，明显高于其他类肿瘤对照组的阳性率(23．7%)以及健康对照组(10．9%)，具有统计学的意义(P＜0．05)。鼻咽癌组患者的血浆EBV-DNA浓度较高，达到了13654．5 copies/mL，而其他类肿瘤对照组及健康对照组的血浆EBV-DNA浓度均为0，具有统计学的意义(P＜0．05)。观察还发现血浆EBV-DNA阳性的鼻咽患者晚期血浆EBV-DNA拷贝数较高，达到了(201．48±176．19)，明显高于早期的血浆EBV-DNA拷贝数(9．60±10．77)，两组数据进行比较，具有统计学的意义(t=4．3312，P=0．0001)。结论荧光定量的PCR检测血浆EBV-DNA是1种比较可靠的方法，能够有效诊断鼻咽癌，且血浆EBV-DNA与鼻咽癌的分期关系密切，该方法适合广泛地推广。

血浆;EBV-DNA;鼻咽癌分期

(The Practical Journal of Cancer，2015，30:1116～1118)

鼻咽癌是多发于我国南方的一种恶性肿瘤，地域的特征比较典型，多分布于广西广东及福建省等地［1］。一部分的患者常发病隐匿，等到显露症状时多为晚期，严重的影响生活质量，且在临床上的治疗较棘手，预后也极差，因此有必要对病症进行准确有效的诊断及监测［2］。相关的资料显示，鼻咽癌和EB病毒之间存在密切的关系，鼻咽癌的患者血浆/血清中能够检测出肿瘤的源性EB病毒的DNA即EBV-DNA［3］。EB病毒(EBV)目前会使传染性的单核细胞出现增多的症状，为嗜B淋巴的细胞中的病毒成员，据资料显示，EBV和人类目前的多种恶性肿瘤均存在相关性，尤其和鼻咽癌有着密切的关系，患者外周血的EBV-DNA所处水平和病灶残留、复发及转移等均有显著的关系［4］。近年来随着定量PCR的技术发展，检测血浆中EB-DNA也引起了学者的注意［5］。为此，我院对接受的鼻咽癌患者进行EBV-DNA表达水平与鼻咽癌分期的相关性进行研究，取得了不错的效果，具体如下。

1 资料与方法

1．1 临床资料

本次研究中选择了自2013年11月至2014年11月在我院接受治疗的55例鼻咽癌的患者，全部患者均经鼻咽活检病理检查证实。本次研究是在患者的知情下实施，并经我院伦理委员会的认可。鼻咽癌组中39例男性患者，16例女性患者，年龄为19～66岁，平均年龄为(41．0±5．4)岁，病理类型:3例泡状核癌，4例中分化鳞癌及48例低分化鳞癌。临床分期:10例Ⅰ期，15例Ⅱ期，20例Ⅲ期，10例Ⅳ期。同时选取同期住院治疗的55例其他类型的肿瘤患者作为其他类肿瘤对照组，其中40例男性，15例女性，年龄为20～69岁，平均(42．9±4．7)岁;20例肺癌，13例胃癌，11例乳腺癌，7例淋巴癌及4例直肠癌。再选取55例体检健康者为健康对照组，其中40例男性，15例女性，年龄为20～64岁，平均年龄为(40．1±4．9)岁，各个方面检查均为正常者，见表1。

表1 三组研究对象的基本资料比较分析/例

1．2 方法

抽取所有研究对象3 mL血加入EDTA的抗凝管中，经过1 600 g离心后，将上层的血浆进行分离，取出50 μL的血浆置于-20℃中冻存，使用Qiagen(德国)生产的试剂盒，按照说明书提示对血浆的DNA进行提取。采用荧光定量的PCR法对血浆EBV-DNA进行检测，EBV基因的扩增试剂盒是由中山大学的达安诊断中心所提供，设备为Roche公司(德国)生产出Light-CyclerII型荧光定量的PCR仪，具体的检测方法按照说明书来操作。

1．3 评价方法

计算血浆中的EBV-DNA:C=Qx(1/Vcxt)× (VDNA/VPCR)，其中C是待测血浆中EBV-DNA浓度(mL-1)，Q是PCR进行扩增后由计算机所检测出原始DNA的拷贝数，VDNA抽提后所得DNA的稀释液的体积，VPCR是用来PCR扩增后DNA的体积，Vcxt是抽提DNA时用到的血浆体积。检测的极限是0 mL-1，≥0 mL-1为阳性［6］。

1．4 统计学分析

2 结果

2．1 鼻咽癌组与对照组患者血浆EBV-DNA阳性检出情况

观察发现，鼻咽癌组患者血浆EBV-DNA检出阳性率为72．7%，明显高于其他类肿瘤对照组的阳性率(23．7%)及健康对照组阳性率(10．9%)，对数据进行比较具有统计学的意义(P＜0．05)。

2．2 鼻咽癌组与对照组血浆EBV-DNA浓度比较分析(表2)

观察发现鼻咽癌组患者的血浆EBV-DNA浓度较高，达到了13654．5 copies/mL，而其他类肿瘤对照组及健康对照组的血浆EBV-DNA浓度均为0 copies/ mL，进行比较，具有统计学意义(P＜0．05)。

表2 鼻咽癌组患者与对照组血浆EBV-DNA浓度的比较分析(copies/mL)

2．3 血浆EBV-DNA阳性的鼻咽患者早期和晚期的拷贝数比较分析

观察发现血浆EBV-DNA阳性的鼻咽患者晚期的血浆EBV-DNA拷贝数较高，达到了(201．48± 176．19)，明显高于早期的血浆EBV-DNA拷贝数(9．60±10．77)，对两组数据进行比较，具有统计学意义(t=4．3312，P=0．0001)。

3 讨论

鼻咽癌为发生在鼻咽腔的顶部及侧壁处的1种恶性肿瘤，是正常上皮组织经过分化而产生的［7］。该疾病的发病与环境的因素、遗传的易感性、饮食的习惯及EB病毒的感染等多种因素均有关系，不过与EB病毒间相关性更大［8］。目前我国NPC的发病率约占全世界的80%，因为解剖的位置较为特殊，往往不能够通过手术进行切除治疗，对患者的生活和生理上带来了不利的影响，且易局部复发和转移致使患者死亡，给患

者的生命危险带来了威胁［9］。

当前，诊断NPC、病情的进展及预后可以通过影像学的检查来完成，但是该检查方法价格昂贵，且容易漏诊［10］。资料又显示在患者体内能检测出来多种的EB病毒抗体，抗体的指标能帮助鼻咽癌患者的筛查及辅助的诊断［11］。但是曹素梅等人在对NPC的患者进行放疗治疗中监测发现，当肿瘤开始缩小时，EBVDNA的水平出现迅速的下降，但抗体的水平却无明显的变化，显示在对NPC患者的治疗效果进行监测时，比EB病毒抗体有更好的效果［12］。

临床上发现使用荧光定量的PCR技术来对NPC诊断及检测具有不错的效果［13］。Tan等使用RT-PCR技术对游离的EBV-DNA片段进行检测发现，患有鼻咽癌的人所检出的阳性率比正常的人群明显要高，在鼻咽癌的患者中DNA定量达到2043 copies/mL，要高于正常人群的0 copies/mL，说明血浆EBV-DNA对于鼻咽癌的诊断具有价值［14］。在本次研究中，也发现在鼻咽癌患者中检出的阳性率为72．7%，要高于其他类肿瘤患者的阳性率23．7及健康人群的阳性率10．9%。同时鼻咽癌患者的血EBV-DNA浓度较高，达到了13654．5 copies/mL，而其他类肿瘤患者及健康人群的血浆EBV-DNA浓度均为0 copies/mL，这与文献内容一致。

相关资料显示，血浆EBV-DNA表达水平差异与鼻咽癌分期呈一定的相关性［15］。在本次研究也同样发现血浆EBV-DNA拷贝数和鼻咽癌的分期有直接关系，患者晚期(Ⅲ、Ⅳ期)的血浆EBV-DNA拷贝数达到了201．48±176．19(×104拷贝/mL)，多于患者早期(Ⅰ、Ⅱ期)的血浆EBV-DNA拷贝数201．48±176．19 (×104拷贝/mL)。证明了在鼻咽癌的不同分期中，EBV-DNA的含量是有差异的，显示出EBV-DNA的含量和患者体内的肿瘤符合呈正相关，能够用来评定疗效及对病情进行检测。

总之，血浆EBV-DNA检测是1种比较可靠的研究方法，能够有效的诊断鼻咽癌，且血浆EBV-DNA的表达水平的差异与鼻咽癌的分期关系密切，检测血浆EBV-DNA能够帮助患者发现鼻咽癌疾病的危险性。

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Correlation Analysis of Plasma EBV-DNA Expression and NPC Staging

LUO Wanyuan，TANG Ying，HE BenfuThe 421 Hospital of PLA，Guangzhou，510318

ObjectiveTo research the correlation between the expression level of plasma EBV-DNA and nasopharyngeal carcinoma(NPC)staging．Methods55 cases of NPC，55 cases of other types of cancer as tumor control group and 55 cases of healthy patients as healthy control group were selected，all patients were treated in our hospital at the same period．The positive rates and concentration of plasma EBV-DNA of the 3 groups，the plasma EBV-DNA copy number at early and last period of plasma EBV-DNA positive patients were compared and analyzed．ResultsThe positive rate of NPC group was 72．7%，which was significantly higher than of other types of tumors(23．7%)and healthy control group(10．9%)，there had statistical difference(P＜0．05)．The concentrations of plasma EBV-DNA in NPC patients reached13654．5 copies/mL，while that of other groups both were 0 copies/mL，there had statistical difference(P＜0．05)．Among the plasma EBV-DNA positive patients，the copies of plasma EBV-DNA at last period reached(201．48±176．19)，which was higher than at early period(9．60±10．77)，there had statistical difference(t=4．3312，P=0．0001)．ConclusionFluorescence quantitative PCR detection of plasma EBV-DNA is reliable，it can effectively diagnose NPC，and plasma EBV-DNA is closely related with NPC staging．It is worthy of promotion．

Plasma;EBV-DNA;Staging of nasopharyngeal carcinoma(NPC)

10．3969/j．issn．1001-5930．2015．08．003

R739．63

A

1001-5930(2015)08-1116-03

2015-03-29

2015-04-29)

(编辑:吴小红)

广东省科技计划项目(编号:2012B031800408)

510318解放军四二一医院

何本夫