★　张晗羚　华碧春　(福建中医药大学药学院　福州 350122)

山豆根急性毒性实验研究

★张晗羚华碧春(福建中医药大学药学院福州 350122)

摘要：目的:实验研究山豆根水煎液对小鼠的急性毒性，为山豆根的临床安全与合理用药提供实验依据。方法:采用灌胃给药的方式，按照经典急性毒性实验方法测定山豆根水煎液的小鼠口服半数致死量(LD50)值，观察小鼠中毒症状，记录小鼠的累计死亡数和体重变化。结果:小鼠口服山豆根水煎液的LD50及95%可信限为47.918(45.192～50.665)g·kg-1，主要毒性症状为闭眼、怠动、腹式呼吸等。结论:小鼠一次性口服大剂量山豆根水煎液可造成急性中毒，中毒表现主要为肝脏的损伤。

关键词：山豆根；水煎液；急性毒性

山豆根为豆科属植物越南槐SophoratonkinensisGagnep.的干燥根和根茎[1]。苦，寒，有毒。归肺、胃经。具有清热解毒，利咽消肿之功效。主治火毒蕴结、咽喉肿痛、牙龈肿痛、口舌生疮及肺热咳嗽等症。《求真本草》将其誉为“治疗咽喉肿痛第一要药”。本品始载于《开宝本草》：“解诸药毒，止痛，消疮肿毒，急黄发热，咳嗽，杀小虫。”又名为广豆根、南豆根、北豆根、苦豆根等，主要分布在我国东北、华北和西北等地。由于自古以来中药同名异物现象的普遍存在，山豆根与防己科植物蝙蝠葛MenispermumdauricumDC.的干燥根茎——北豆根的混淆用药加剧了人们对于山豆根毒性的误解，许多医家畏其毒而不敢用，限制了山豆根良好药效的发挥。近年来中药的不良反应受到了社会各界的广泛关注，山豆根的临床不良反应报道屡见不鲜，但实验研究报道仍不多见。现本文对小鼠单次灌服山豆根水煎液后出现的急性毒性反应做了初步研究，以期为山豆根的毒性评价和临床安全用药提供参考。

1动物、材料与仪器

1.1动物健康KM小鼠(合格号SCXK(沪)2012-0002)，雌雄各半，SPF级，体重(20±2)g，由上海斯莱克动物中心提供，动物饲养在福建中医药大学动物实验中心SPF级饲养室，实验期间自由饮水、摄食，室内温度恒定在21℃～24℃，湿度恒定于40%～60%，通风良好。

1.2药材山豆根药材，产地广西，批号20130315，购置于福州回春药业有限公司，经福建中医药大学药学院杨成梓教授鉴定系为豆科属植物越南槐SophoratonkinensisGagnep.的干燥根和根茎。

1.3仪器电子天平FA2004N(上海)；离心机80-2B(上海安亭科学仪器厂)；旋转蒸发仪RE-52(上海亚荣生化仪器厂)；循环水真空泵SHB-III(郑州长城科工贸有限公司)；水浴锅(上海锦屏科学仪器公司)。

2实验方法

2.1山豆根药材的制备取山豆根药材100g，加10倍量水(1 000mL)浸泡60min，武火煮沸后文火煎煮30min，纱布过滤倒出滤液；滤渣再加5倍量水(500mL)煎煮，武火煮沸后文火煎煮30min，合并两次滤液，3000r·min-1，离心20min，倒出上清液，旋转蒸发仪浓缩至生药量2.0g·mL-1，4℃保存，备用。

2.2山豆根水煎液半数致死量(LD50)测定根据预实验结果，山豆根水煎液可测出小鼠口服LD50值，LD0=40g·kg-1，LD100=60g·kg-1。按照改良寇氏法计算组间r=0.9。正式实验分设5个剂量组，剂量分别为60g·kg-1、54g·kg-1、48.6g·kg-1、43.74g·kg-1、39.37g·kg-1。

取KM小鼠60只，雌雄各半，按体重随机分成6组(空白对照组和5个剂量组)。小鼠禁食不禁水12h后，按最大灌胃量40mL·kg-1体积灌胃给药1次，空白组灌胃等体积的蒸馏水。各组给药2h后恢复给食，正常饲养，观察14d；给药30min内，连续观察；30min～2h，每10min观察1次；2h～4h，每30min观察1次；4h～8h，每1h观察1次；8h～24h，每4h观察1次；24h之后，每天观察1次。观察内容为小鼠进食、饮水、毛色、精神、呼吸等一般情况及中毒和死亡情况。观察期间每日记录小鼠的体重，死亡小鼠解剖肉眼观察各脏器有无异常变化。

2.3统计学方法采用Bliss软件计算山豆根水煎液的LD50。

3结果

3.1山豆根水煎液半数致死量(LD50)山豆根水煎液灌胃小鼠25min后出现小鼠抽搐，继而死亡。多数小鼠的死亡集中在12h内，各组小鼠的死亡率分别为100%、80%、60%、30%、0%(表1)，灌胃后不同时间小鼠的累计死亡数见图1。死亡动物解剖时肉眼可见少部分肝脏存在散在淤血点。根据各组死亡数计算LD50值为47.918g·kg-1，95%可信限为45.192～50.665g·kg-1。

回归方程y(Probit)=-8.977+0.187log(D)

半数致死量LD50=47.918g·kg-1

LD50(Feiller)校正95%可信限=45.192～50.665g·kg-1

LD5=39.139g·kg-1

LD95=56.698g·kg-1

表1　山豆根水煎液半数致死量

图1　山豆根水煎液小鼠急毒(LD50)实验时间-累计死亡曲线

3.2山豆根水煎液致小鼠急性毒性症状山豆根水煎液灌胃1min后小鼠出现双目闭合、怠动、竖毛等毒性反应，毒性症状的发生率及发生时间呈现一定的剂量相关性。毒性症状在给药后48h内基本消失。小鼠灌胃山豆根水煎液急性毒性症状见表2。

表2　山豆根水煎液小鼠急性毒性症状

3.3山豆根水煎液急毒(LD50)实验存活动物体重变化60g·kg-1剂量组动物全部死亡，最后一只死亡时间在第7d，存活期间每日称重，体重呈现下降趋势。其余各组动物体重增长缓慢。低剂量组增长趋势高于高剂量组。给药后第4d各给药组小鼠体重逐渐恢复正常增长(图2)。

图2　山豆根水煎液急毒(LD50)存活实验动物体重变化

4讨论

山豆根为临床常用药，现代中西医结合临床将山豆根用于治疗咽喉肿痛、牙龈肿痛、抗肿瘤和抗心律失常等症。但山豆根的不良反应真实存在且不容忽视，临床报道中以胃肠道反应和神经毒性反应引起的损害为主，两者经常伴行。据不完全统计分析，山豆根所引起的消化系统和神经系统的不良反应占其总不良反应的32.21%和31.46%。根据吕莉莉等[2]通过对山豆根临床药理和有效成分的深入研究后发现，山豆根主要活性成分为生物碱，所占比例为0.93%，包括苦参碱、氧化苦参碱和槐果碱等。Lan Tang等[3]通过UPLC发现，山豆根的药效主要是山豆根中其他物质转化为苦参碱和氧化苦参碱而发挥作用。但苦参碱和氧化苦参碱对中枢神经系统有初期呈兴奋，继以麻痹的作用，因此苦参碱和氧化苦参碱既是活性成分也是毒性成分[4]。本文通过灌胃山豆根水煎液五个剂量组观察小鼠急性毒性发现：山豆根水煎液的半数致死量(LD50)为47.918g·kg-1，出现的主要急性毒性症状有倦怠、呼吸急促、闭眼、竖毛等。药物性不良反应一直是药物安全性评价研究的重点，尤其是近年来中药的药物性不良反应更是引起了一番热议。为了加强临床的安全合理用药，除了按照传统中医药理论中的配伍理论和药性理论减毒增效外，对其毒性进行实验研究，了解山豆根的毒性特点是非常必要的。根据中药配伍中的“七情配伍”理论，配伍减毒是有效降低其毒性的最常用方法之一。目前报道的山豆根配伍单味药减毒增效比例前五的主要为甘草(4.9%)、桔梗(3.4%)、玄参(2.4%)、薄荷(2.2%)、黄芩(2.0%)[5]。根据中药药性理论，甘味药能补、能和、能缓，即具有补益、和中、调和药性的作用。如张仲景用药，常用甘草与麻黄、附子、乌头等力峻或有毒之品同用；在诸多配伍甘草以降低药物毒性或峻烈之性的方剂中最具代表性的为四逆汤和调胃承气汤[6]。郑洪波[7]也有报道，山豆根配伍甘草可减轻毒性，甚至可作为山豆根中毒后急救措施之一。华碧春[8]认为要预防山豆根的不良反应，要严格掌握用法用量，煎煮时间不宜过长，或用研末冲服。山豆根可引起肝毒性，本实验通过解剖死亡小鼠肉眼观察也证实了这一点。根据盛云华[9]所研究山豆根水煎液致小鼠急性肝毒性的时-效、量-效关系及病理形态学变化显示，给药1 h即出现肝小叶周围性胞质疏松；2 h出现多个单细胞坏死及空泡变形；6 h后肝细胞核固缩，细胞肿大气球样变性；肝指数显著升高，肝脏组织损伤在24 h最严重；72 h后损伤减轻。本次实验结果显示山豆根单次大剂量给药会加重肝脏负担，造成肝脏的病理组织损伤，且呈现一定的时量效关系。

本文结果显示：单次大剂量服用山豆根可引起小鼠肝脏急性损伤，长期服用是否会产生蓄积损伤及损伤是否可逆和减轻肝损伤的机制都还有待于进一步研究，因此临床上运用山豆根应把握好用药剂量，并进一步加强山豆根质量控制研究，保证临床的安全有效。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2011:25-26.

[2]吕莉莉,谢元璋,孙蓉.基于功效和物质基础的山豆根毒性研究进展[J].中国药物警戒,2011,8(2):105-107.

[3]Tang L, Dong L, Peng X, et al. Pharmacokinetic characterization of oxymatrine and matrine in rats after oral administration of radix Sophorae tonkinensis extract and oxymatrine by sensitive and robust UPLC-MS/MS method[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2013,83:179-185.

[4]郑丽娜,孙虎,谢元璋,等.山豆根化学成分与功效、毒性相互关系的研究进展[J].食品与药品,2011,13(5):205-209.

[5]李进,王均宁,孟丽萍.基于方剂组成统计分析的山豆根减毒增效配伍规律探讨[J].中华中医药杂志,2014,29(9):2 993-2 996.

[6]潘英伟,陈卫平,奚丽君.甘草减毒作用的应用与机理分析[J].南京中医药大学学报,2008,24(6):428-430.

[7]郑洪波,王吕成,杨旭红,等.山豆根中毒致共济失调和视力下降1例报告及文献回顾[J].华西医学,2007,22(3):590.

[8]华碧春.中医临床安全与合理用药[M].香港:香港万里出版机构出版,2009:167-169.

[9]盛云华,李峰杰,周绮,等.山豆根对小鼠急性肝毒性及其病理形态学研究[J].中国实验方剂学杂志,2010,16(6):144-146.

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Study on Acute Toxicity of Radix et Rhizome Sophorae Tonkinensis

ZHANG Han-ling ，HUA Bi-chun

CollegeofPharmacy,FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122,China

Abstract:Objective： To study the acute toxicity of water extract of Radix et Rhizoma Sophorae Tonkinensis (RRST) in mice to provide experimental data for safe use in clinal. Methods :With the method of lavage for medicine, the LD50of water extract of RRST were tested by the classical methods of acute toxicity. Observed the symptoms of the acute toxic including the number of death animals and the weight-changes of live mice. Results:The LD50(95% cconfidence interval) of water extract of RRST was 47.918(45.192～50.665)g·kg-1in mice. The main acute tixical symptoms were eyes closed, lazied, shortness of breath and so on. Conclusion:Mice taking high-dose water decoction of RRST one-time can cause acute toxicity and poisoning mainly for liver damage.

Key words:Radix et Rhizome Sophorae Tonkinensis; Water Extract; Acute Toxicity

收稿日期：(2015-01-09)编辑：王河宝

中图分类号：R285.5

文献标识码：B