腹可安片中东莨菪内酯提取工艺的正交实验法优化

2015-02-23符小英林志绣

天津药学 2015年4期

关键词：内酯供试条件

林清，符小英，林志绣

(1.广东医学院附属医院药学部，湛江 524001； 2.广东恒诚制药有限公司，湛江 524022)

药物制剂

腹可安片中东莨菪内酯提取工艺的正交实验法优化

林清1，符小英2，林志绣1

(1.广东医学院附属医院药学部，湛江 524001； 2.广东恒诚制药有限公司，湛江 524022)

目的：优选腹可安片中东莨菪内酯的提取工艺。方法：以干膏得率和处方中的主要药效成分东莨菪内酯含量为观察指标，采用正交实验法筛选最佳提取工艺条件。结果：最佳提取方法为10倍量水，煎煮3次，每次1.5 h,醇沉浓度为60%。结论:优选的提取方法为腹可安片中东莨菪内酯含量测定提供可靠方案，保证产品质量。

腹可安片，正交实验，提取工艺

腹可安片由扭肚藤、火炭母、救必应、车前草、石榴皮组成，具有清热利湿、收敛止痛的功效，主要用于治疗急性胃肠炎、消化不良引起的腹痛、腹泻、呕吐等症。方中扭肚藤、火炭母清热利湿，救必应清热解毒、利湿止痛，共为主药。扭肚藤为木犀科植物扭肚藤(JasminumamplexicauleBuch -Ham)的茎叶，可清热解毒、利湿消滞，用于急性胃肠炎、痢疾等症[1]，其主要化学成分包括东莨菪内酯等[2]。为了有效控制该制剂的质量，保证其临床疗效，笔者以干膏得率和提取液中东莨菪内酯的含量为考查指标，采用正交实验法对其提取工艺进行研究。

1 仪器与试药

岛津10A高效液相色谱仪(LC-10AD 泵、SPD-10A 紫外检测器、N2000 色谱工作站)， HN1006型超声清洗机(中国华南超声设备厂)；BP211D型电子天平(德国赛多利斯公司)。东莨菪内酯对照品(中国药品生物制品检定所，批号110768-200504)；腹可安片 (广东恒诚制药有限公司生产，规格：素片0.21 g/片，批号1501101、1501102、1501103)；乙腈为色谱纯，甲醇、磷酸均为分析纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：Kromasil C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(23∶77)，流速：1.0 ml/min；柱温：室温；检测波长：346 nm；进样量：10 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取减压干燥至恒重的东莨菪内酯对照品适量，加甲醇制成每1 ml 含82 μg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min，滤过，用甲醇15 ml分3次洗涤残渣和器皿，同样滤过，全部滤液置蒸发皿中，水浴上挥干，再用流动相溶解残渣并转移至5 ml的量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过(0.45 μm微孔滤膜)，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 标准曲线与线性范围精密称定东莨菪内酯对照品，加甲醇分别制成每1 ml含东莨菪内酯10.25、20.5、30.75、41.0、61.5和82.0 μg的溶液，再分别精密吸取10 μl按“2.1”项下色谱条件测定，以峰面积积分值(Y)为纵坐标，东莨菪内酯浓度(X)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=6.06×10-5X-3.10(r=0.999 5)。结果表明，东莨菪内酯浓度在0.102 5～0.82 μg/ml范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验精密吸取东莨菪内酯对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次。结果，RSD为0.52 %(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验取“2.2.2”项下供试品溶液，分别于0、2、4、6、8和12 h进样，按“2.1”项下色谱条件测定东莨菪内酯对照品峰面积，RSD为1.2 %(n=6)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.6 重复性试验取同一批(批号1501101)的腹可安片6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件测定东莨菪内酯含量。结果，平均含量为492 μg/g，RSD为1.89 %(n=6)，表明方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验取同一批(批号1501101)已知含量(东莨菪内酯含量为492 μg/g)的腹可安片，除去包衣，研细，精密称取0.5 g，置于锥形瓶中，分别精密加入高、中、低三个浓度各3份的对照品溶液，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算加样回收率，结果平均回收率为99.30%，RSD为0.31%，见表1。

表1 加样回收率试验结果(n=9)

2.8 莨菪内酯提取条件优化

2.8.1 正交试验设计根据文献资料[3]，采用水提醇沉工艺，选取了对东莨菪内酯提取率影响较大的煎煮次数(A)、煎煮时间(B)、醇沉浓度(C)、加水量(D)作为考查因素, 以干膏得率和东莨菪内酯的含量作为考查指标，采用L9(34)正交设计进行试验，因素水平表见表2。

表2 正交试验因素水平表

2.8.2 试验安排及结果根据因素水平表，选用L9(34)表进行试验。见表3-表5。由表4和表5方差分析可以看出，对于东莨菪内酯浸膏得率A为显著性因素；对于东莨菪内酯含量A、B、C为显著性因素、其中A因素最为显著。由表3可以看出，影响东莨菪内酯提取率和浸膏得率的因素均为煎煮次数>煎煮时间>醇沉浓度>加水量。根据表3直观分析考虑东莨菪内酯浸膏得率，工艺条件应选择A3B3C1D3；若考虑提取率，工艺条件应选择A3B2C1D3。综合方差分析、极差数据，并从节省加热时间和能源的角度考虑，选择的最佳提取工艺为A3B2C1D3即煎煮3次，煎煮1.5 h，醇沉浓度60%，加水量为10倍。

2.8.3 验证试验按照优化工艺条件操作，进行3次重复试验加以验证。结果表明：东莨菪内酯含量均较高(平均含量为134.87 μg/片)，说明正交设计筛选的工艺是合理的。