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改良溴化乙锭染色法快速检测基因组DNA

2015-02-13田秀荣郭丽高兵刘健

中国医科大学学报 2015年11期
关键词:检测方法

田秀荣,郭丽,高兵,刘健

(沈阳医学院1.细胞生物学与遗传学教研室;2.科学实验中心,沈阳 110034)

改良溴化乙锭染色法快速检测基因组DNA

田秀荣1,郭丽2,高兵1,刘健1

(沈阳医学院1.细胞生物学与遗传学教研室;2.科学实验中心,沈阳 110034)

目的探讨一种耗时少、检出率高的基因组DNA检测方法。方法采用改良的溴化乙锭染色法检测提取到的样本基因组DNA。采用分光光度仪进行敏感性验证,聚合酶链式反应确认该方法能否用来检测PCR产物。结果改良的溴化乙锭染色法显著减少基因组DNA的上样量,提高基因组DNA的检测敏感性,节省操作时间,无需loading buffer,并可粗略估计基因组DNA浓度。结论改良的溴化乙锭染色法只适用于初筛样本基因组DNA,不能用于评估DNA片段的长度。

琼脂糖凝胶电泳法;基因组DNA;溴化乙锭

基因组DNA提取被广泛应用于医学、生命科学的许多领域[1]。2003年人类基因组计划的完成,为人类利用基因组DNA遗传密码破解疾病机制奠定了基础[2]。成百上千例样本的病例-对照研究越来越多的被用于筛选疾病相关候选基因及其变异位点和在基因水平阐明疾病的发病机制。这些研究中需要先期进行大规模的样本基因组DNA提取和检测工作。

长期以来,基因组DNA提取后的检测是通过琼脂糖凝胶电泳/溴化乙锭染色法进行观察[3~5]。这种方法在基因组DNA样本检测的时候,需要样本DNA的上样量较大。在微量DNA上样时或提取的基因组DNA含量低时,敏感性差,不易观察到阳性结果。此外,琼脂糖凝胶电泳检测法用于检测大批量样本基因组DNA时,显得有些费时、费材、费力。……

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