徐利剑，吴叶锋，赵凤杰，胡海英，刘海鹏

(1.浙江众益制药股份有限公司，浙江 丽水 323000；2.浙江普洛康裕天然药物有限公司，浙江 金华 321017；3.优胜美特制药有限公司，浙江 金华 321025)



HPLC法测定健脑补肾丸中甘草酸含量

徐利剑1，吴叶锋2，赵凤杰2，胡海英3，刘海鹏2

(1.浙江众益制药股份有限公司，浙江 丽水 323000；2.浙江普洛康裕天然药物有限公司，浙江 金华 321017；3.优胜美特制药有限公司，浙江 金华 321025)

目的：建立高效液相色谱法测定健脑补肾丸中甘草酸的含量。方法：使用Ultimate XB-C18柱，以甲醇∶0.2mol/L乙酸铵溶液︰冰乙酸(63∶37∶2)为流动相，检测波长为250nm。结果：甘草酸在0.015～0.45mg/mL范围内线性关系良好，平均回收率为98.1%，RSD为0.94%。结论：本方法准确、快速、简便、重现性好，可以有效用于健脑补肾丸制剂的质量控制。

健脑补肾丸；甘草酸；高效液相色谱；含量测定

健脑补肾丸以人参、鹿茸为君药，当归、白芍、山药和白术为臣药，佐以杜仲、牛膝等十八味药，使以甘草调和诸药，起健脑补肾、益气健脾、安神定志之功。临床应用的健脑补肾中成药剂型主要为口服液和传统丸剂。健脑补肾口服液的质量标准(WS3-B-2209-96)中只对人参药材进行简单鉴别，健脑补肾丸质量标准中仅有显微鉴别。文献使用HPLC法测定健脑补肾丸中的绿原酸[1]，但该制剂组方与本研究有差别，本研究所考察的健脑补肾丸的药味多达25味，且采用醇提、水提二种工艺，成分更复杂。甘草酸含量是整个工艺过程中(水提、浓缩、干燥等工序)的重要控制参数。本研究以甲醇︰36%乙酸(25∶5)作溶剂提取甘草酸，并建立了HPLC法测定健脑补肾丸中甘草酸的含量。

1 仪器与试药

10A型高效液相色谱仪(日本Shimadzu公司)。健脑补肾丸(荣昌制药(淄博)有限公司，规格：每15粒重2g，批号 100608、100609、100610)；甘草酸铵对照品(中国食品药品检定研究院，批号110731-200614，纯度97.95%)；甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸、乙酸铵和冰乙酸为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 溶液配制

对照品溶液：精密称取甘草酸铵对照品适量(相当于甘草酸 12.5mg)，置25mL量瓶中，加流动相溶解并定容，摇匀；精密移取该溶液5mL置50mL量瓶中，加流动相定容，摇匀，制成含150μg/mL的对照品溶液。

供试品溶液：取样品适量，研细，精密称取1.5g置具塞锥形瓶中，精密加入溶剂25mL，称重，超声处理(功率350W，频率40kHz)40min，放冷，称重后用溶剂补足损失的量，摇匀，过滤，即得。

空白溶液：按处方量称取缺甘草的药材，按健脑补肾丸制备工艺制成缺甘草样品；取缺甘草样品适量，研细，精密称取1.5g，同供试品溶液制备方法操作，即得。

2.2 色谱条件

色谱柱为Ultimate XB-C18柱；流动相为甲醇︰0.2 mol/L乙酸铵溶液︰冰乙酸(63∶37∶2)；检测波长为250nm；流速为1.0mL/min；柱温为35 ℃；进样量为10μL。理论板数按甘草酸峰计不低于2 500。典型色谱见图1。

2.3 线性试验

精密称取甘草酸铵对照品38.28mg(相当于甘草酸37.5mg)置25mL量瓶中，加流动相溶解并定容，制成1.5mg/mL的对照品贮备液；分别精密移取贮备液1、2、3mL，各置100mL量瓶中，加流动相定容；进一步稀释，得甘草酸浓度分别为0.015、0.03、0.045、0.15、0.3、0.45mg/mL的对照品溶液，分别进样测定，以进样量m为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归，得回归方程A=4.254 6×105m+854.97，r=0.999 9。表明甘草酸在0.015～0.45mg/mL浓度范围内线性关系良好。

2.4 精密度试验

取供试品溶液，连续进样6次，计算得甘草酸含量的RSD为1.17%，表明仪器精密度良好。

2.5 重复性试验

精密称取同批样品，共6份，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，分别进样测定，结果甘草酸含量的RSD为1.16%，表明本方法重复性良好。

2.6 稳定性试验

将供试品溶液分别于配制后0、1、2、4、8、24h进样，结果甘草酸含量的RSD为1.79%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。

2.7 回收率试验

精密称取已知含量的同批样品约0.75g，共5份，分别精密加入甘草酸铵对照品0.66mg，研细混匀。按“2.1”项下供试品溶液制备方法操作，进样测定。结果甘草酸的平均回收率为98.1%，RSD为0.94%(n=5)。

2.8 样品测定

取3批健脑补肾丸，分别按“2.1”项下方法制备供试品溶液，进样测定，结果甘草酸含量分别为0.86、0.65和0.77mg/g。暂定本品每克含甘草以甘草酸(C42H62O16)计不得低于0.6mg。

3 讨论

本试验采用甲醇︰36%乙酸(25∶5)超声提取，可有效提取检测指标成分并减少干扰，操作简单，误差小。

取对照品和供试品，配成一定浓度的样品，照紫外方法[2]在紫外光区190～400nm的波长范围内扫描，结果在250nm波长处有最大吸收。同时，在250nm处，所用流动相及溶剂、辅料等空白均无吸收。对照品和供试品测得相邻杂质峰的分离度均大于1.5，故选定检测波长为250nm。

虽然从现有文献及中国药典中可以查阅到健脑补肾丸中各味药材的检测方法，但在实际应用中，单味药材的检测并不代表在不同处方的制剂产品中适用。在本品的水提、浓缩、干燥等工序中，投入甘草药材中甘草酸的含量与成品含量的比例较稳定。故本研究以甘草酸为指标成分，采用HPLC法测定，可为健脑补肾丸的质量控制提供参考。

[1] 靳维荣, 高国敬, 藤建北. 高效液相色谱法测定健脑补肾丸中绿原酸含量[J]. 时珍国医国药, 2006,17(2):195-196.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M]. 北京：中国医药科技出版社，2010.

(责任编辑：魏 晓)

Determination of Glycyrrhizic Acid in Jiannao Bushen Wan by HPLC

Xu Lijian1, Wu Yefeng2, Zhao Fengjie2, Hu Haiying3, Liu Haipeng2

(1.Zhejiang Zhongyi Pharmaceutical Co.Ltd., Lishui 323000，China;2. Zhejiang Apeloa Kangyu Natural Medicine Co.Ltd., Jinhua 321017，China;3. Yosemade Pharmaceutical Co.Ltd., Jinhua 321025，China)

Objective:An HPLC method was established for the determination of glycyrrhizinic acid in Jiannao Bushen Wan. Methods:An Ultimate XB Cl8column was used with the mobile phase of methanol∶0.2mol/L ammonium acetate solution:glacial acetic acid(63∶37∶2) at the detection wavelength of 250nm. The calibration curve was linear in the concentration range of 0.015～0.45mg/mL.Results: The average recoveries was 98.1%, with RSD of 0.94%.Conclusion:The method is accurate, rapid, simple and reproducible, can be used for quality control of Jiannao Bushen Wan.

Jiannao Bushen Wan; Glycyrrhizinic Acid; HPLC; Determination

2014-09-29

徐利剑(1974-)，男，浙江众益制药股份有限公司工程师，研究方向为药品质量控制。

R284

A

1673-2197(2015)03-0028-02

10.11954/ytctyy.201503011