刘 烨

（山东省济宁市第一人民医院 医学检验科，山东济宁272000）

·论 著·

冠心病血瘀证患者与健康人血清蛋白质表达的差异

刘 烨

（山东省济宁市第一人民医院 医学检验科，山东济宁272000）

目的：研究冠心病瘀血证患者与健康人在血清蛋白质表达方面存在的差异。方法：选取8例冠心病血瘀证患者以及8名健康人士作为本次实验的研究对象，分析两组患者血清蛋白质存在的差异。结果：冠心病血瘀证患者与健康人士相差12个蛋白质点。结论：冠心病血瘀证患者的相关蛋白主要集中在脂质代谢与炎症反应方面，并且发现了具有进一步研究价值的黄醇结合蛋白4。

冠心病血瘀证；健康人士；血清蛋白；表达差异

血瘀证是冠心病中比较常见的一类疾病。在中医领域中蛋白质组学技术的应用，给中医研究提供了实质性的研究新方法［1］。为了进一步提高冠心病血瘀证的治疗技术，本院采用蛋白质组学相关技术对关系并血瘀证患者与健康人士的血清蛋白进行了对比分析，希望能够找到冠心病血瘀证患者的相关特异性蛋白。现将本次实验做如下详细报道。

1 资料与方法

1.1 临床资料：选取我院2014年3月～2015年3月所诊治的8例冠心病血瘀证患者以及8例健康人士作为本次实验的研究对象，冠心病血瘀证患者有男性患者4例，女性患者4例，平均年龄为（32.897±1.58）岁，健康人士中有男性5例，女性3例，平均年龄为（33.567±1.63）岁。两组对象在年龄与性别分布方面不存在明显差异，（P＜0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 血清标本的采集与电泳：（1）清晨采集两组人群的外周静脉血，标准3mL，然后将采集的血液放置于非抗凝的真空采血管中，使用3000rpm对血清进行分离，10min后将其放置在－80℃的环境中存储，备用。（2）使用Bradford法测定两组人群的血清样本的蛋白质浓度，并进行双向的凝胶电泳。时间30min。（3）每块胶使用17W的恒定功率进行电泳，指导溴酚蓝的指示线达到凝胶底边，2－DE凝胶固定以后，使用G－250考马斯亮蓝进行染色。

1.2.2 图像分析：使用ImageScanner和LabScan对凝胶脱色后的血清样本进行透射扫描，然后使用PD－Quest软件对凝胶图谱的蛋白质点进行检查，并进一步进行统计、分析，寻找两组人群的平均蛋白质点差异。

1.3 统计学分析：将数据纳入SPSS19.0统计软件中进行分析，计数资料比较采用χ2比较，以率 （%）表示，计量资料比较采用t检验，并以 （±s）表示，若（P＜0.05）则差异显著，有统计学意义。

2 结果

2.1 2－DE结果：对所采集的两组中的任一单个血清样本分别进行双向得到凝胶电泳分离，每个血清样本都获得了8个凝胶图谱，图一为典型的双向凝胶电泳图。使用PDQuest软件对图谱信息进行分析，健康人士的平均蛋白质点数为（153.27±21.63），冠心病血瘀证患者的平均蛋白质点数为（146.28±19.84），通过匹配分析和背景消减，得出冠心病血瘀证患者与健康人士的蛋白质点差异为12个。2.2 质谱鉴定结果：对12个蛋白质点进行质谱分析，得到每一个蛋白质点的肽质量指纹谱，使用NCBInr数据库和进行搜索，11个蛋白质点为阳性，然后通过整合重复蛋白质点后，确认6个差异的蛋白质点。对两组的蛋白质点进行比较，表达上调的有结合珠蛋白、血清蛋白和视黄醇结合蛋白4，表达下调的有载脂蛋白AI。还有两个差异蛋白质点，由于没有充分的证据，因此在此暂不进行说明。

3 讨论

相关研究表明，结合珠蛋白是一种急性相蛋白，在多种应急反应过程中，结合珠蛋白的表达会明显的增加，并且其在炎症、减少细胞损伤以及抗氧化反应中也有非常重要的作用［2］。血清蛋白是在人体的血清中含量最丰富，其浓度对于冠心病的发现与预后有非常重要的预测价值。视黄醇结合蛋白4与血清水平的升高和脉粥样硬化有紧密联系［3］。冠心病血瘀证患者的相关蛋白主要集中在脂质代谢与炎症反应方面，存在的6个差异的蛋白质点中，结合珠蛋白、血清蛋白以及视黄醇结合蛋白4为表达上调，载脂蛋白AI为表达下调，还有两个差异蛋白质点未得到准确诊断，并且发现了具有进一步研究价值的视黄醇结合蛋白4，为寻找冠心病血瘀证患者的相关蛋白提供了依据。但是本次研究是得出了部分与冠心病血瘀证相关的蛋白质的信息，为了进一步的将信息完善，还应该进行更深层次的探索。

［1］蒋跃绒，李雪峰，高铸烨，等.冠心病血瘀证患者血小板骨架蛋白差异表达分析［J］.中国循环杂志，2014，（z1）：193－194.

［2］薛梅，陈可冀，马晓娟，等.血府逐瘀口服液对冠心病血瘀证患者血液流变学的影响及其与人类血小板抗原3基因多态性的相关性 ［J］.中西医结合学报，2008，6（11）：1129－1135.

［3］戴泽龙，陈慧，吴小盈，等.冠心病血瘀证患者细胞色素P4502C19*17基因型分布与氯吡格雷治疗后血小板聚集率及出血风险的关系 ［J］.中西医结合学报，2012，10（6）：647－654.

Coronary heart disease（CHD）patients and healthy peop le of blood stasis syndrome of serum protein expression differences

LIU Ye
The first people＇s Hospital of Jining City，Shandong Province，Jining Shandong 272000

Objective：to study the blood stasis syndrome in patientswith coronary heart disease and healthy people in terms of serum protein expression differences.M ethods：8 patientswith coronary heart disease，blood stasis and eight healthy people as the research object of this experiment，the analysis of two groups of patients with serum protein differences.Results：the coronary heart disease（CHD）patients and healthy people of blood stasis syndrome differ 12 point of protein.Conclusion：blood stasis syndrome in patients with coronary heart disease related proteins aremainly concentrated on lipid metabolism and inflammatory reaction，and found that the yellow alcohol has further research value binding protein 4.

coronary heart disease；blood stasis；Healthy people；serum protein；expression differences

R541

A

1002－2376（2015）09－0005－02

2015－07－04