李 甜 陈红香 廖礼彬 冯树梅 秦 纹 白生宾

（新疆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，乌鲁木齐830011；1新疆维吾尔自治区人民医院妇科，乌鲁木齐830000；）

组织切片的化学染色有多种方法，其中苏木精－伊红染色（hematoxylin eosin staining，HE）是最常用的染色方法之一，但是HE染色也存在一些缺陷，例如染液配制步骤复杂、不适于现配现用等［1］。然而一些常用的特殊染色操作相对简单，结果较为稳定，可以弥补HE染色中的不足，特殊染色技术在组织切片观察中起到了不可替代的作用。本实验采用阿利辛蓝AB染色（Alcian Blue）、过碘酸雪夫氏反应PAS染色（Periodic Acid Schiff）及洋红三种染色方法，比较人结肠组织光镜下的染色特点和结构特征，以期为组织胚胎学的教学和学习提供教学资料，为病理学的诊断提供特殊染色基础和参考。

材料和方法

1.材料

选取新疆医科大学第一附属医院送检的正常的结肠组织，Carnoy氏固定液固定。

2.主要仪器

Leica切片机、贴片机和Olympus显微镜。

3.主要试剂

3.1 阿利辛蓝染色液即用型套组（阿利辛蓝染液1瓶20mL，核固红染液1瓶20ml）：由珠海贝索生物技术有限公司提供。

3.2 过 碘 酸 溶 液：0.5g过 碘 酸（HIO4）溶 于100mL蒸馏水中，待溶解后置于4℃冰箱避光保存。

3.3 雪夫氏剂（Schiff试剂）：在三角烧杯内加入蒸馏水500ml，煮沸后，在保持微沸的情况下，加入碱性品红2.5g，并不断摇动约5min（勿使之沸腾），使碱性品红彻底溶解（溶解液为深红色）。冷却到50℃时，过滤，加入1N盐酸50ml，再待冷却至25℃时加入偏重亚硫酸钠2.5g，塞住瓶口，摇动容器以充分混合（此时颜色明显变淡），然后避光放置或冰箱内24h，溶液为淡黄或淡红色，再加入活性炭5g，混合后振荡数分钟，静置1h，再用双层滤纸过滤，此时溶液应完全无色、清澈透明，为无色品红。封口，贮存于棕色瓶中（最好外包黑纸避光）存放入4℃冰箱备用［2］。

3.4 偏重亚硫酸钠：1N盐酸7.5ml加10%偏重亚硫酸钠7.5ml，再加130ml蒸馏水混合而成。

3.5 醋酸洋红染液：将1000ml 45%醋酸水溶液煮沸，慢慢加入1g洋红。冷却后静置6h，过滤入棕色瓶保存备用。

4.方法

4.1 组织标本取材固定包埋，结肠组织Carnoy氏固定液固定3h，进入脱水剂100%酒精Ⅰ脱水2h、100%酒精Ⅱ脱水2h，进入半苯半酒精和透明剂二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明各2h直至包埋，在半苯半蜡浸蜡40min，蜡Ⅰ、蜡Ⅱ浸蜡各25min，包埋成蜡块，切片厚6μm，贴片机38℃贴片，40℃温箱烤片4天。

4.2 染色（1）结肠组织阿利辛蓝AB染色：组织切片脱蜡后，阿利辛蓝染液10－20min，蒸馏水冲洗；核固红染液复染5－10min，蒸馏水冲洗；常规脱水透明，中性树胶封固。（2）结肠组织PAS染色：组织切片脱蜡后，至1%过碘酸中染色5min，蒸馏水冲洗，再至雪夫氏剂中染色5min，10%偏重亚硫酸钠染色2min，入酒精常规封片。（3）结肠组织洋红染色：组织切片脱蜡后，醋酸洋红染液15min，蒸馏水冲洗。

结 果

从图1中可见，三种染色方法均能对结肠组织进行很好的染色，但是染色效果有所不同。

1.AB染色法显示，结肠粘膜上皮吸收细胞细胞核染为红色，杯状细胞呈空泡状，胞质内的粘液染为蓝色；有许多密集排列的大肠腺，大肠腺腺腔内染为蓝色。

2.结肠组织PAS染色显示，切片总体染色较浅，吸收细胞细胞核染为蓝色，细胞质染为淡粉色。可见杯状细胞呈空泡状，胞质内黏液染色淡粉色。

3.结肠组织洋红染色显示：结肠粘膜上皮细胞核染为蓝紫色，细胞质染为红色。杯状细胞呈空泡状，胞质内的粘液染为红色。大肠腺腺腔内染为红色。

讨 论

随着医学实验技术的发展，HE染色已经不能够满足医学形态学学科发展的需要，特殊染色越来越多地应用于医学以及其他相关学科。特殊染色对于实验教学、组织的观察研究、疾病诊断等方面起着举足轻重的作用。其中阿利辛蓝AB染色、过碘酸雪夫氏PAS染色及洋红染色等这几种染色是比较常用的特殊染色。由于其染色方法显示不同的物质，具有不同的染色效果，选取此三种染色进行染色对比有利于观察人结肠的组织结构特点。阿利辛蓝是显示酸性黏多糖最特异的染料，根据组织化学的染色机理，阿利辛蓝染色法可清楚显示结肠组织内的黏液基质，弥补了HE染色在观察黏液时的不足［3－4］。过碘酸雪夫氏PAS染色多用于糖原的鉴定和黏液的显示，它是先采用过碘酸（HIO4）氧化使乙二醇基变为乙二醛基，醛可以与雪夫氏剂相结合，生成红色的反应物。PAS呈阳性反应的物质主要有多糖，中性粘多糖、黏蛋白及糖蛋白。人结肠粘膜上皮杯状细胞顶部膨大，内含大量的黏原颗粒，化学分析表明，此黏液主要由分子量巨大的糖蛋白构成，其分子末端富含唾液酸和硫酸酯类等酸性糖链，可用阿利辛蓝染色显示，PAS反应强阳性［5］。

虽然三种染色方法均能不同程度地显示出人结肠的组织学结构。但是，从本实验染色上，从不同的角度呈现了结肠组织的3种不同染色剂的染色效果，综合3种染色结果：三种染色都能清晰显示结肠组织的轮廓，阿利辛蓝AB染色使吸收细胞的细胞核染为红色，杯状细胞黏液染为蓝紫色；洋红染色使吸收细胞的细胞核染为蓝紫色，杯状细胞黏液染为红色。PAS能清晰显示结肠组织的细胞及细胞核轮廓，可见杯状细胞呈空泡状，未出现PAS反应强阳性，胞质内黏液染色较浅［5］。PAS染色效果不稳定，往往着色很浅或不显色，可能与过碘酸的浓度或者处理时间因素有关［6］。与人结肠组织HE染色切片作对比，HE染色以伊红染细胞质，以苏木素染细胞核，着色均匀，能清晰呈现细胞轮廓，但对结肠杯状细胞黏液无法显示。阿利辛蓝和洋红染色使用简易，试剂配制简单，现配现用，染色方法也简单，能清楚显示杯状细胞的黏液，并呈现出颜色互补，对比明显。这为组织胚胎学与病理学的教学提供较为丰富的资料，并为病理学的诊断和鉴别诊断提供一定的基础。特殊染色方法的广泛应用为临床病理诊断和病理学、组织学的教学和研究打下坚实的基础。

［1］张祥令，陈腾祥，臧贵勇等.组织切片 PT和 HE、PAS、PASH、PAST染色方法的比较.贵阳医学院学报，2011，36（3）：319－320

［2］付银峰.PAS染色方法及应用.河南科技大学学报，2008，26（2）：100－101

［3］董妙珠、肖萍、叶于薇等.PAS、AB染色法在软骨黏多糖检测中的应用.上海预防医学杂志，2004，16（9）：419－420

［4］邓振旭，楚德昌.消化道组织块黏液细胞的组织化学染色.生物技术，2007，17（6）：42－43

［5］成令忠，钟翠平，蔡文琴.现代组织学，上海：上海科学技术文献出版社，2003，799－805

［6］郭效忠，刘春荣.过碘酸－Schiff（PAS）染色方法的几处调整和改进.诊断病理学杂志，2013，20（7）：448