宋争昌，张 萍，陈 愉，孟 玲，赵 立

（1中国医科大学附属盛京医院，辽宁 沈阳 110000；2泰山医学院附属医院，山东 泰安 271000）

鲍曼不动杆菌广泛存在于自然界、医院环境、人体皮肤表面，属于条件致病菌。其具有强大的获得耐药性和克隆传播的能力，多重耐药、广泛耐药、全耐药鲍曼不动杆菌呈世界性流行［1］，是医院内流行的主要致病菌之一。近年来，在重症监护病房（intensive care unit，ICU）中，鲍曼不动杆菌感染发病率不断上升，也迅速出现了多重耐药菌株，这对临床诊疗造成一定困难。本研究组对某院呼吸科ICU （respiratory intensive care unit， RICU）2011年11月—2012年10月住院患者标本分离的40株鲍曼不动杆菌进行了脉冲场凝胶电泳（pulsedfiel d gel electrophoresis，PFGE）同源性及聚类分析，并总结其临床特点、耐药性及传播特点，以指导临床加强防控，提高治疗有效率。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源 40株鲍曼不动杆菌分离自某院RICU 2011年11月—2012年10月住院且符合医院感染诊断标准［2］的患者，其中34株分离自痰标本，肺灌洗液和导管引流液标本各分离3株。

1.1.2 主要试剂与仪器 蛋白酶K、XbaⅠ限制性内切酶、λLadder（日本Ta Ka Ra公司）；低温高速台式离心机（美国科峻公司）；CHEF－Mapper XA型脉冲电泳仪、低熔点琼脂糖、GIS－700D数码图像扫描分析系统（美国Bio－Rad公司）。

1.2 资料收集 收集RICU 40例鲍曼不动杆菌感染患者的临床资料。

1.3 PFGE 检测

1.3.1 增菌 细菌接种于LB肉汤振荡培养过夜，12 000 r／min离心1 min；CSB缓冲液1 mL冲洗后，8 000 r／min离心5 min，弃上清。

1.3.2 DNA原位纯化 应用EC缓冲液调整菌液浊度为4麦氏单位后，用2%低熔点琼脂糖200μL迅速混匀，加入模具，4℃冰箱放置20 min；用蛋白酶K 1.5 mL进行裂解。

1.3.3 酶切 在PF管中加入限制性内切酶XbaⅠ50 U，37℃、24 h酶切。……