崔 磊, 黎 江, 刘 辉, 吴红平, 李林芳, 郝方元, 金华君, 钱其军,

(1. 浙江理工大学生命科学院新元医学与生物技术研究所, 杭州 310018; 2. 第二军医大学上海东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室, 上海 200438)

自表达SIRPα-Fc融合蛋白对T细胞功能的影响

崔 磊1, 黎 江2, 刘 辉2, 吴红平2, 李林芳2, 郝方元2, 金华君2, 钱其军1,2

(1. 浙江理工大学生命科学院新元医学与生物技术研究所, 杭州 310018; 2. 第二军医大学上海东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室, 上海 200438)

探讨携带SIRPα-Fc(SF)融合基因蛋白基因的重组腺病毒Ad35-SF感染T细胞后对T细胞功能的影响。腺病毒Ad35-SF感染Jurkat T细胞后,通过Western blotting及ELISA方法检测细胞上清中SF融合蛋白的大小与表达量;通过流式分析技术检测细胞表面CD47的封闭情况;通过CCK8方法检测细胞的增殖与对肿瘤细胞的杀伤作用。结果表明,Ad35-SF构建成功,其感染Jurkat T细胞后,能在其内表达并分泌产生大小约为48 kD的SF蛋白,细胞上清中SF的表达量可到达19.1 μg/mL。Ad35-SF(MOI=1)感染Jurkat细胞18 h后,细胞CD47阳性比例从97.06%下降到15.32%;当Ad35-SF感染复数增加至5,10时,CD47阳性比率进一步降低至2.94%和1.73%。相对于空病毒对照组,Ad35-SF感染Jurkat细胞48 h后其增殖效果提高了29%,对肝癌细胞株Hep 3B的杀伤作用提升25.6%(p<0.01)。结果表明构建的重组腺病毒Ad35-SF能有效感染Jurkat细胞并在其内表达分泌SF蛋白,封闭细胞表面的CD47,同时显著提高Jurkat细胞的增殖能力和对肝癌细胞的杀伤作用。

CD47; T细胞; 腺病毒; 肝癌

0 引 言

CD47是肿瘤细胞表面高表达的膜蛋白[1],其能与巨噬细胞表面的CD47的受体—信号调节蛋白α(Signal Regulatory Protein α,SIRP α)结合,释放“不吃我”信号,抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用,导致肿瘤细胞免疫逃逸[2-3]。研究表明,当CD47与SIRPα的结合被阻断后,可以增强巨噬细胞对肿瘤的吞噬作用[4-6]。另有研究表明,活化的T淋巴细胞中CD47高表达[7-8],其能与另一种CD47受体——血小板反应蛋白1(Thrombospondin-1,TSP1)结合,抑制T淋巴细胞的增殖与活化,进而影响T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用[9-12]。……