郑罗凝, 徐增辉, 王 真, 钱其军,

(1. 浙江理工大学生命科学学院, 杭州 310018; 2. 第二军医大学东方肝胆外科医院, 上海 200438)

基于OptiPrep的循环肿瘤细胞富集体系研究

郑罗凝1, 徐增辉2, 王 真2, 钱其军1,2

(1. 浙江理工大学生命科学学院, 杭州 310018; 2. 第二军医大学东方肝胆外科医院, 上海 200438)

建立一种简易高效的外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cell, CTC)富集方法。配比不同浓度的OptiPrep溶液梯度离心分离外周血各细胞成分,比较OptiPrep液与现行Ficoll液富集肿瘤细胞的效率、回收率、活性率。以此系统富集肿瘤患者血样中的CTC,结合免疫磁珠筛选、染色体原位荧光杂交和表面抗原免疫荧光技术精确鉴定CTC细胞。结果显示OptiPrep液以1.079 g/mL的密度浓度在1 900 r/min离心20 min为最优分离条件。32例临床肿瘤患者血样的CTC检测实验中,均发现有循环肿瘤细胞的存在。结果表明基于OptiPrep液结合免疫磁珠筛选能有效富集外周血循环肿瘤细胞,为实验室常规开展CTC的计数、培养等研究奠定基础。

OptiPrep分离介质; 密度梯度离心法; 循环肿瘤细胞; 免疫磁珠

0 引 言

循环肿瘤细胞(circulating tumor cell, CTC)从原发肿瘤病灶脱落下来,通过血液循环系统传播到远端器官,在新的环境中生长并形成转移病灶。目前认为,肿瘤复发的关键在于CTC潜在的侵袭能力[1]。有报道显示CTC检测及其预后相关性对于评估临床治疗效果十分有意义。除了转移性癌症患者的预后价值以外,CTC对于早期癌症的预测价值也很有吸引力[2]。因而CTC成为研究癌症治疗和转移潜在机制的重要生物标志物。然而,外周血中能检测到的CTC个数极少,每7.5 mL血液中可能仅含几个[3],从而对血液中富集CTC这一技术提出了挑战。……