李 霞，李 继，戴 涌，刘海静

(陕西省食品药品检验所，陕西 西安 710065)

复方甘草麻黄碱片是由盐酸麻黄碱、石膏、杏仁、甘草浸膏和碳酸钙等成分组成的复方制剂，主要成分为盐酸麻黄碱，具有舒张血管、兴奋神经和镇咳祛痰等作用，临床用于治疗咳嗽、咳痰及喘息性支气管炎和单纯性支气管炎引起的咳嗽。国家药品监督管理局药品标准[1]规定对其中的盐酸麻黄碱进行含量测定，方法为碱化后氯仿提取，采用高氯酸非水滴定测定含量，该法操作复杂，萃取过程中损失较大，且易受其他成分和辅料等因素影响，专属性较差。本试验中采用高效液相色谱法对盐酸麻黄碱的含量进行测定，方法专属性高，方法简便、快速、准确，重现性好，适用于复方甘草麻黄碱片中盐酸麻黄碱的含量测定。

1 仪器与试药

Waters Alliance HT 型液相色谱仪，包括Waters 2487 检测器;Mettler AE240 型电子天平，超声波振荡仪。甲醇均为色谱纯，磷酸二氢钾为分析纯，水为超纯水;盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号为171242-200404);复方甘草麻黄碱片(批号为120901，样品来源为省级药品抽验)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:Diamonsil (钻石)C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:0.1 mol/L 磷酸二氢钾-甲醇(75 ∶25)，流速:1.0 mL/min;检测波长:210 nm;进样量:20 μL。进样分析对照品溶液，记录色谱图，见图1 A。盐酸麻黄碱峰的保留时间为8.0 min，理论板数为10 300，拖尾因子为1.1，符合色谱分析的要求。

2.2 溶液配制

精密称取盐酸麻黄碱对照品52.75 mg，置50 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液;再精密量取10 mL 置50 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液，置冰箱4 ℃保存备用。取复方甘草麻黄碱片20 片，研细，精密称取粉末约0.11 g(相当于盐酸麻黄碱10 mg)，置100 mL 容量瓶中，加水适量，超声提取10 min 后，加水至刻度，精密量取5 mL 置50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。根据复方盐酸麻黄碱的处方制备不含盐酸麻黄碱的阴性样品，照供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:取2.2 项下的阴性对照品溶液，按2.1 项下色谱条件进样20 μL，记录色谱图。结果表明，处方中其他成分和辅料对结果没有影响，方法专属性良好。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:分别吸取2.2 项下对照品贮备液0.5，1.0，2.5，5.0，7.5，10.0 mL，分别置100 mL 容量瓶，加水至刻度，即得系列质量浓度的对照品溶液。照2.1 项下色谱条件各进样2 次按拟订色谱条件测定。以对照品峰面积为纵坐标( Y)、对照品质量浓度(X)为横坐标进行线性回归，得回归方程Y =42 973 X +3 856(r=0.999 9)。结果表明，盐酸麻黄碱质量浓度在1.06 ～21.1 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取2.2 项下同一对照品贮备液，分别稀释成低、中、高质量浓度的对照品溶液(5.3，10.6，15.8 μg /mL)，照2.1 项下的色谱条件分别于1 d 之内连续进样5 次，考察日内精密度;连续3 d 每天进样1 次，考察日间精密度。结果盐酸麻黄碱的日内和日间的RSD 均小于1.5%(n =5)，表明仪器精密度良好。

加样回收试验:取复方甘草麻黄碱片约0.056 g，精密称定，置100 mL 容量瓶中，分别精密加入盐酸麻黄碱对照品贮备液(1.055 mg/mL)7，5，3 mL，照2.2 项下样品溶液的配制方法制备，即得高、中、低3 种浓度的样品;每种浓度各配制3 份，按2.1项下色谱条件测定。结果见表1。

表1 盐酸麻黄碱加样回收试验结果( n=9)

重复性试验:取供试品粉末6 份，精密称定，照2.2 项下样品制备方法制样，2.1 项下色谱条件测定。结果盐酸麻黄碱平均含量为97.7%，RSD 为0.3%(n=6)，表明方法重复性好。

稳定性试验:取重复性试验项下同一份供试品溶液，分别在1，2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24 h 时照2.1 项下色谱条件各进样20 μL，记录峰面积。结果含量的RSD 为0.2%，表明供试品溶液在24 h 内稳定。

定量限及检测限:逐级稀释2.2 项下的对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样。以信噪比分别为10 ∶1，3 ∶1 计，盐酸麻黄碱的定量限为10.6 ng/mL，检测限为1.06 ng/mL。

2.4 样品含量测定

按2.2 项下的方法配制试品溶液各3 份，用0.45 μm 的滤膜过滤，分别取续滤液进样测定，每个样品重复进样3 次，按外标法以峰面积计算含量。结果3 批样品中盐酸麻黄碱含量分别为标示量的98.5%，99.8%，98.7%，平均99.00%，RSD=0.71%(n=3)。

3 讨论

样品前处理:复方甘草麻黄碱片是由化学药品和中药构成的复方制剂，成分相对复杂，在含量测定时样品的前处理尤其重要。国家药品监督管理局药品标准[1]中样品前处理采用的是样品碱化后用氯仿反复提取。文献[2]报道，采用水溶解加高碘酸和氢氧化钠反应后，用盐酸调节pH，上述方法均烦琐且损失大。考虑到盐酸麻黄碱在水中较易溶解，本试验中采用超声水提法，样品经过滤后直接进样，结果该方法操作简单，提取效率高，回收率完全满足色谱分析的要求。

色谱条件的确定:在麻黄碱的测定中，流动相的使用有多种，如甲醇-水[2]、0.092%磷酸溶液(含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺)-甲醇(1.5 ∶98.5)[3]、乙睛-0.02 mol /L 磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH 至3.0) -0.2%三乙胺(5 ∶95 ∶0.1)[4]或乙腈-0.1% 磷酸(10 ∶90)[5]。因为乙腈毒性较大，且价格较贵，故本试验在筛选流动相时，首选甲醇为有机相。当以甲醇-水为流动相时，发现样品中盐酸麻黄碱和其他成分的分离不好，且盐酸麻黄碱的峰形较差。经过多次试验后，最终确定以0.1 mol /L 的磷酸二氢钾-甲醇(72 ∶28)为流动相，以Diamonsil (钻石)C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)为固定相时，盐酸麻黄碱的峰形最好，拖尾最小且与其他成分的分离度较好，理论板数超过10 000;而且采用不同厂家的柱子和适当的改变流动相的比例、柱温和流速，除盐酸麻黄碱的保留时间有少许变动外，峰形均较好。表明该方法专属性高，方法简便、快速、准确，重现性好，适用于对复方甘草麻黄碱片中麻黄碱的含量测定。

检测波长的选择:通过对对照品溶液的紫外波长扫描，盐酸麻黄碱在254 nm 波长处有最大吸收，在200 ～220 nm 处有较大的末端吸收。考虑到254 nm 波长处的吸收灵敏度较低且有其他成分的干扰，最终选择了210 nm 的末端吸收为检测波长。经试验其他成分、溶剂及辅料在该波长下对麻黄碱的测定均无干扰。

[1] WS-10001 - (HD-1343) -2003，国家食品药品监督管理局国家药品标准[S].

[2] 黄璐敏，简淑娟. 甘草麻黄碱片的质量控制方法研究[J]. 中国药房，2005，16(16)：1 259.

[3] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部) [M]. 北京：中国医药科技出版社，2010：301.

[4] 吴芳花，邬月鑫. 高效液相色谱法测定止咳平喘类药中盐酸麻黄碱含量[J]. 中国药业，2014，23(1)：22 -23.

[5] 李文烈，姬雪礼，曹海芳，等. 高效液相色谱法测定加味定喘片中盐酸麻黄碱含量[J]. 中国药业，2013，22(6)：70 -71.