孙荣青 ，朱丽超，周新阁，杨宏富，李菲菲，史晓奕

1)郑州大学第一附属医院ICU 郑州450052 2)遂平县第一人民医院神经外科 遂平463100

△女，1963年12月生，教授，主任医师，研究方向:器官保护、脓毒症，E-mail:rongqing.sun@126.com

脑红蛋白(neuroglobin，NGB)是2000年由德国Burmester 等［1］首先发现的人体内第三类携氧球蛋白，主要在脑组织中表达，能够特异性地向脑组织供氧，具有神经保护作用。促红细胞生成素(erythropoietin，EPO)成年后主要来源于肾脏，由肾小管及管旁毛细血管内皮细胞与间质细胞合成分泌［2］。已有动物实验［3］表明，重组人促红细胞生成素(rhEPO)可以诱导大鼠脑损伤后NGB 的表达。但临床应用rhEPO 观察其对颅脑损伤患者NGB 表达影响的研究很少。Corwin 等［4-5］研究发现，与安慰剂相比，大剂量rhEPO 的使用能减轻重症颅脑损伤患者的病死率。作者应用大剂量rhEPO 治疗颅脑损伤患者，检测血清中NGB 的含量，同时监测患者血红蛋白(hemoglobin，HGB)的含量及急性生理学及慢性健康状况评分系统Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluation Ⅱ，APACHE Ⅱ)评分的变化，综合评价药物作用。

1 材料与方法

1.1 病例选择 选取2012年8月至2013年6月郑州大学第一附属医院ICU 收治的颅脑损伤患者50例。均经过CT 检查，符合入选标准:①在创伤后24 h 之内入院。②格拉斯哥昏迷评分(GCS)3～12分。③无凝血功能障碍。排除标准:①有精神异常或其他神经系统器质性疾病。②患者有或使用rhEPO 后出现红细胞增多症。③有使用rhEPO 的禁忌证。剔除标准:①入住ICU 时间小于2 周。②使用rhEPO 后发生不良反应者。③患者红细胞压积持续增高，男＞0.50(正常值0.40～0.50)，女＞0.45(正常值0.37～0.45)。采用盲法分为rhEPO组30例，对照组20例。两组的年龄、性别、GCS 分值、损伤类型等差异无统计学意义(P ＞0.05)。该研究在通过郑州大学伦理委员会审核并取得患者本人或家属同意后进行。

1.2 治疗方法 所有患者均于入院当日给予常规治疗，包括应用甘露醇、甘油果糖及七叶皂甙酸钠脱水降颅压，给予营养神经药物，给予依达拉奉清除氧自由基及头部持续冰块物理降温等局部亚低温治疗。rhEPO组在此基础上于入院后第3、6、9、12 天给予rhEPO(沈阳三生药业，国药准字:S20010001，10 000 IU/次，1 次/d)皮下注射。2组治疗期间为防止铁缺乏，常规口服铁剂琥珀酸亚铁薄膜衣片(速力菲，金陵药业，国药准字:H10930005，100 mg/次，2 次/d)、叶酸片(斯利安药业，国药准字:H10970079，0.4 mg/次，顿服)，并补充维生素B12(紫 竹 药 业，国 药 准 字:H11021993，25 μg/次，3 次/d)。

1.3 观察指标 所有患者均于入院时、入院第4、7、10 和14 天进行监测。①一般指标:记录患者基本的生命体征，包括体温、呼吸频率、心率、血压，进行APACHE Ⅱ评分。②NGB 检测:采静脉血3 mL，采用枸橼酸钠抗凝剂抗凝，2 h 内离心取血清，置－70℃保存。后期统一解冻，采用ELISA 法检测血清NGB 含量。③HGB 检测:采静脉血3 mL，采血后2 h 内送郑州大学第一附属医院检验科生化室检测，记录结果。

1.4 统计学处理 采用SPSS 19.0 进行分析，应用重复测量数据的方差分析比较两组患者不同时间点血清NGB、HGB 含量及APACHE Ⅱ分值，检验水准α=0.05。

2 结果

两组患者不同时间点血清NGB、HGB 含量及APACHE Ⅱ分值的变化见表1～3。rhEPO组患者血清NGB、HGB 含量较对照组增高，且随时间的变化，rhEPO组患者两种蛋白表达逐步增高。rhEPO组患者APACHE Ⅱ分值较对照组降低，且随时间的变化，2组患者APACHE Ⅱ分值均降低，但对照组降低幅度较rhEPO组小。

表1 两组患者不同时间点血清NGB 含量的变化 μg/L

表2 两组患者不同时间点血清HGB 含量的变化 μg/L

表3 两组患者不同时间点APACHE Ⅱ分值的变化

3 讨论

王航雁等［6］发现人体不同组织中均有NGB mRNA 的表达，但不同的组织其表达水平不同，其主要存在于大脑中。珠蛋白家族是一类广泛存在于细菌、真菌、动植物中的氧和亚铁血红素蛋白，其功能包括:结合氧及转运氧，清除一氧化氮(NO)活性成分或解毒等。NGB 作为珠蛋白家族中的一员，在具备上述功能的同时，还具有进化功能的独特性［7］，NGB 神经元定位［1］和可能的内源性神经保护因子的功能［8］，使其成为神经科学研究的热点。

Sun 等［8］报道，通过反义寡聚脱氧核酸转染培养神经细胞，未转染组NGB 的表达明显下降，且在缺氧环境中NGB 表达的下降加速了神经细胞的死亡;重组质粒pcDNA-NGB 转染HN33 细胞后，HN33细胞内NGB 的含量明显高于对照组，且发现NGB的高表达可以降低缺氧环境中细胞的死亡率。另一项实验［9］结果显示，经过NGB-TAT 培养的大鼠皮质神经元细胞对氧的敏感性降低，提示NGB 对缺氧性损伤的脑细胞具有保护作用。Herold 等［10］研究认为，NGB 可能具备清除缺氧性脑病体内氧化产物的功能，如NO、H2O2、NO2等;Fordel 等［11］的研究结果表明NGB 在抵御氧化损伤中起重要作用，进一步验证了Herold 的观点。王航雁等［12］在另一项研究中发现脑缺血再灌注损伤大鼠神经元NGB 的表达变化呈现时间规律性，也提示NGB 对缺血缺氧性脑损伤有保护作用。

近年来研究发现，EPO 受体广泛存在于各种非造血组织［13］，具有多种非造血作用，是一种全身性的保护性细胞因子［14］。动物实验［2］表明，rhEPO可以诱导大鼠脑损伤后NGB 的表达。作者临床应用rhEPO 治疗颅脑损伤患者，发现患者血清NGB 含量较对照组明显升高，且随时间的变化，血清NGB、HGB 含量逐步增高。APACHE Ⅱ是目前临床上重症监护病房应用最广泛、最具权威性的危重病情评估系统，它可用于回顾性评价，也可用于实时评分、跟踪病情动态变化、定量反映疾病严重程度，可以客观地评定患者病情及预测病死率。该研究结果显示，使用rhEPO 的患者APACHE Ⅱ分值较对照组下降，说明rhEPO 可以减轻患者病情。

总之，通过临床应用，作者发现rhEPO 不仅可以促进颅脑损伤患者的NGB 和HGB 的表达，改善患者贫血，减少输血率，同时又可以降低APACHEⅡ评分，是一种潜在的有效的神经保护药物。但仍有许多未解决的问题，如rhEPO 具体用量问题以及合并其他疾病如肿瘤时其是否可应用的问题等。对于rhEPO 如何促进NGB 和HGB 的表达这一机制也不是特别清楚。故对于临床应用rhEPO 还需要更多的理论研究和实验支持。

［1］Burmester T，Weich B，Reinhardt S，et al.A vertebrate globin expressed in the brain［J］.Nature，2000，407(6803):520

［2］Fisher JW.Erythropoietin:physiology and pharmacology update［J］.Exp Biol Med(Maywood)，2003，228(1):1

［3］朱灵，汤永红，袁旭光，等.促红细胞生成素对大鼠脑缺血后神经元凋亡及热休克蛋白27 和血管内皮生长因子表达的影响［J］.中国动脉硬化杂志，2007，15(2):97

［4］Corwin HL，Gettinger A，Fabian TC，et al.Efficacy and safety of epoetin alfa in critically ill patients［J］.N Engl J Med，2007，357(10):965

［5］Corwin HL，Gettinger A，Pearl RG，et al.Efficacy of recombinant human erythropoietin in critically ill patients:a randomized controlled trial［J］.JAMA，2002，288(22):2827

［6］王航雁，邓美玉，王静，等.脑红蛋白基因在人体不同细胞组织中的表达［J］.实用儿科临床杂志，2004，19(4):278

［7］邓亚仙，高宝勤，杨伟力.脑红蛋白的研究进展［J］.国外医学:儿科学分册，2004，31(5):272

［8］Sun Y，Jin K，Mao XO，et al.Neuroglobin is up-regulated by and protects neurons from hypoxic-ischemic injury［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2001，98(26):15306

［9］Zhou GY，Zhou SN，Lou ZY，et al.Translocation and neuroprotective properties of transactivator-of-transcription protein-transduction domain-neuroglobin fusion protein in primary cultured cortical neurons［J］.Biotechnol Appl Biochem，2008，49(Pt 1):25

［10］Herold S，Fago A，Weber RE，et al.Reactivity studies of the Fe(Ⅲ)and Fe(Ⅱ)NO forms of human neuroglobin reveal a potential role against oxidative stress［J］.J Biol Chem，2004，279(22):22841

［11］Fordel E，Thijs L，Martinet W，et al.Neuroglobin and cytoglobin overexpression protects human SH-SY5Y neuroblastoma cells against oxidative stress-induced cell death［J］.Neurosci Lett，2006，410(2):146

［12］王航雁，王静，张荣媛，等.缺血再灌注损伤大鼠脑组织脑红蛋白表达的变化［J］.实用儿科临床杂志，2008，23(21):1680

［13］Lamon S，Russell AP.The role and regulation of erythropoietin (EPO)and its receptor in skeletal muscle:how much do we really know?［J］.Front Physiol，2013，4:176

［14］赵玲莉，耿惠，邓丽君，等.EPO 的临床研究进展［J］.青海医药杂志，2011，41(3):74