周春刚，张志斌，陆 曙

(无锡中医医院中医药研究所，江苏无锡214061)

动脉粥样硬化(AS)中医病因病机复杂，但以肝、脾、肾亏虚为本，以火毒与血瘀、痰湿等浊邪为标，“热”“浊”“肾虚”是AS的基本病理因素，“清热”“泄浊”“补肾”成为治疗动脉粥样硬化的主要治则［1］。笔者在临床根据此治则处方用药取得良好效果［2-3］，经过多年积累，常以自拟“连豆清脉方”为基础方加减，药用:连翘、野料豆、赤芍、莱菔子、牡丹皮等。动脉粥样硬化的早期表现内皮损伤、内皮细胞凋亡、血管内皮功能紊乱，可能影响血压调节，导致平滑肌增生、移位、血液凝固，是血管损伤的重要机制。很多致动脉硬化因子包括氧化低密度脂蛋白、ANGⅡ、氧化应激均能诱导内皮细胞凋亡［4］，而中医药治疗动脉粥样硬化，对防治血管内皮功能紊乱的作用及机制研究已经取得一定的进展［5］。为探讨连豆清脉方防治动脉粥样硬化作用机制，笔者通过建立ANGⅡ诱导内皮细胞凋亡模型，探讨连豆清脉方对内皮细胞线粒体损伤途径的保护作用机制。

1 实验材料

1.1 细胞株 大鼠动脉内皮细胞细胞株(RAOEC R304-05)，从上海拜力生物科技有限公司购买。

1.2 药物和试剂 DMEM高糖(GIBCO)，10%FBS(GIBCO)，0.25% 胰酶(GIBCO)，Angiotensin Ⅱ5mg(美国ENZO)，Annexin V/PI双染流式细胞凋亡检测试剂盒(美国 BD)，SYBR PrimeScript RT-PCR KitⅡ试剂盒(TAKARA DRR083S)，线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)(KGA-601-604)。

1.3 主要仪器 流式细胞仪(美国BD)，LightCycler480 PCR仪(德国ROCHE)，二氧化碳培养箱(美国NUAIRE)。

2 实验方法

2.1 连豆清脉方水提液制备 连豆清脉方组成:野料豆 15 g，连翘 10 g，黄连 3 g，知母 10 g，赤芍 10 g，牡丹皮10 g，莱菔子10 g。水提液制备采用水提醇沉法，采用 DMEM高糖培养基定容，再以孔径为0.22 μm的微孔滤膜过滤除菌，分装，使其含生药量为50 mg/mL(原液)，－70℃贮存备用。……