唐 媚，常 山，曹宗锐，罗兴燕，胡 松，唐信威，王衍堂，刘 阳，邹 强

0 引 言

成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes，FLSs)是组成滑膜层的最大细胞群体，在维持关节正常生理功能和内环境稳态方面发挥重要作用［1］。异常增生活化的FLSs在关节病变中起关键性作用，其已广泛应用于关节疾病发病机制的研究中［2］。目前已建立了较为成熟的体外人［3-4］、大鼠［5-8］FLSs培养体系，主要有组织块培养法［9］和酶消化法［10］。近年来基因敲除小鼠越来越广泛地应用在关节疾病研究中［11］，培养小鼠FLSs的方法现已有报道［12］。然而影响体外培养原代小鼠FLSs数量和纯度的因素较多，如关节处理方法、消化酶种类、酶消化时间等。目前关于此类影响因素研究的报道较少。本研究在体外培养小鼠原代操作过程中，发现影响FLSs数量与纯度有3个主要因素:关节处理方式、消化酶种类及酶消化时间，并对其进行探讨，为获得高数量、高纯度FLSs提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 健康SPF级C57雄性小鼠，6月龄，12只，体重20～30 g，由成都医学院动物中心提供，实验动物合格证号:0017184，在独立通风鼠笼IVC系统饲养，给予标准饲料和饮用水，用于分离培养FLSs。

1.1.2 主要设备 超净工作台(苏州安泰);荧光倒置相差显微镜(Olympus);®流式细胞仪(BD公司)。

1.1.3 主要试剂 胎牛血清(上海普飞)，L-谷氨酰胺、青霉素、链霉素(北京索莱宝)，2-巯基乙醇(美国Sigma);Ⅳ型胶原酶、Ⅱ型胶原酶(Gibco)，流式抗体(BD)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠双后肢取材 将小鼠脱臼处死，置于75%乙醇中浸泡5 min。随后在髋关节处小心取下小鼠双后肢，保证关节面完整。将取得的小鼠后肢置于75%乙醇培养皿中浸泡5 s，用眼科剪纵行剪开皮肤至脚趾尖。……