陈海迪 高旭 张颖 许应天 张立媛 于清洋 鲁承

摘要 [目的] 构建表达鹅细小病毒（GPV）VP3基因的重组腺病毒，为机体免疫试验和免疫效果评价奠定基础。[方法] 以重组质粒pcDNA-VP3为模板，以GPV-VP3为目的基因，构建GPV-VP3重组腺病毒载体，通过转染获得能稳定表达GPV-VP3基因的重组腺病毒，通过IFA和Western-blot检测GPV-VP3基因的表达情况。[结果] 扩增到的GPV-VP3基因全长为1 605 bp，线性化的重组腺病毒穿梭质粒pCR259-VP3能在QBI-HEK293细胞中瞬时表达GPV-VP3基因，表达蛋白的分子量约为60 Ku。[结论] 该重组腺病毒的构建将为GPV新型疫苗研发和后期体内试验奠定基础。

关键词 鹅细小病毒;VP3基因;重组腺病毒;真核表达

中图分类号 S852.65+7 文献标识码

A 文章编号 0517-6611（2014）33-11751-04

Construction and Identification of Recombinant Adenovirus Expressing VP3 Gene of Goose Parvovirus

CHEN Hai-di， GAO Xu， ZHANG Ying et al

（Department of Veterinary Medicine， Agricultural College of Yanbian University， Yanji， Jilin 133002）

Abstract [Objective] The research aimed to construct recombinant adenovirus expressing VP3 gene of goose parvovirus and lay the foundation for making the immunity test and evaluating the immune effects. [Method] Taking recombinant plasmid pcDNA-VP3 as the template， using GPV-VP3 as target gene， the recombinant adenovirus vector of GPV-VP3 was constructed. The recombinant adenovirus that could stably express VP3 gene of goose parvovirus was obtained by transfection. The expression situations of GPV-VP3 were detected by IFA and Western-blot detection. [Result] The complete sequence of amplified GPV-VP3 gene was 1 605 bp. pCR259-VP3 plasmid could transiently express in QBI-HEK293 cells. And the molecular weight of recombinant protein was about 60 Ku. [Conclusion] The construction of recombinant adenovirus laid a foundation for the research and development of a new vaccine of GPV and its experiment in vivo.

Key words Goose parvovirus; VP3 gene; Recombinant adenovirus; Eukaryotic expression

基金項目 吉林省自然科学基金项目（201215230）。

作者简介 陈海迪（1988- ），女，吉林长春人，硕士研究生，研究方向：动物传染病分子生物学与免疫学。*通讯作者，副教授，博士，从事动物传染病分子生物学与免疫学研究。

收稿日期 2014-10-15

鹅细小病毒病（Goose parvovirusis，GP）是由鹅细小病毒（Goose parvovirus，GPV）引起的一种雏鹅和雏番鸭最急性、急性、亚急性及高度接触性传染病[1]。该病主要侵害雏鹅，病程短，雏鹅发病后多在1 d左右死亡，根本来不及治疗，死亡率高，给养鹅业带来了巨大的经济损失[2]。防治鹅细小病毒病，接种有效的疫苗是关键。目前，养鹅业大多采用传统疫苗，但存在散毒和灭活不彻底等潜在危险，而基因工程疫苗弥补了传统疫苗的不足。在众多基因工程疫苗中，由于活载体疫苗能够刺激机体产生持久的体液免疫，可长期抵御外来病原体的侵袭，已成为当今新型疫苗研究的热点。……