吴咚咚 王强 蔡慧慧 施洁莹 付惠玲 王新全 周育 丁林贤

摘要 [目的]探索降解毒死蜱的新的微生物资源。[方法]应用最大或然数（MPN）法，通过添加适量复苏促进因子（Rpf）从多种土壤及污水生物处理系统中分离活的非可培养（VBNC）资源菌种，根据文献报道的已知毒死蜱降解菌株的系统关系综合分析，初步筛选出与已知降解毒死蜱菌种近缘的VBNC菌株并进行降解试验。[结果]共筛选出6株具有毒死蜱降解能力的菌株，其中菌株CHZYR63对毒死蜱的生物降解能力最强，经Box-behnken响应面法优化后降解率可达70.15%。[结论]可培养化VBNC菌种资源在残留农药降解方面有较大的利用价值，为揭示受染环境中VBNC微生物的形成及其活性化、环境污染物质的共代谢等微生物群体的相互作用机制提供了参考。

关键词 Rpf;VBNC;毒死蜱;生物降解;响应面法

中图分类号 S182;X172 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）33-11711-04

Research on Viable but Non-culturable Bacteria in Chlorpyrifos Degradation

WU Dong-dong1，WANG Qiang2，CAI Hui-hui1，DING Lin-xian1* et al

（1. College of Geography and Environmental Science，Zhejiang Normal University，Jinhua， Zhejiang 321004;2. Institute of Quality and Standard for Agro-products， Zhejiang Academy of Agricultural Sciences，Hangzhou， Zhejiang 310000）

Abstract [Objective] The aim was to explore new microbial resources to degrade Chlorpyrifos. [Method] Using MPN system， some strains of the VBNC（viable but non-culturable）bacteria which could degrade Chlorpyrifos were isolated from soil and sewage biological treatment system through adding with some Rpf （resuscitation promoting factor）. [Result] Total six strains of the VBNC were obtained， among them the biodegradability of strain CHZYR63 could reach 70.15% through the analysis of Box-behnken response surface method. [Conclusion] The culturable VBNC bacteria not only have great value in degrading pesticide residues，but also provide important ideas and methods on revealing the formation mechanism and recovery mechanism of VBNC bacteria in polluted environment and total metabolism of environmental pollutants and interaction mechanism of the microbial population.

Key words Resuscitation promoting factor; Viable but non-culturable bacteria; Chlorpyrifos; Biodegradation; Response surface method

基金項目 国家高技术研究发展计划（863）项目（2011AA100806）;国家自然科学基金项目（31340071）;浙江省自然科学基金项目（LY13C010002）。

作者简介 吴咚咚（1986-），男，浙江苍南人，硕士研究生，研究方向：环境微生物技术。*通讯作者，教授，博士，硕士生导师，从事环境微生物研究。

鸣 谢 试验过程中，得到日本东京大学分子与细胞生物学研究所横田明教授提供的Micrococcus luteus菌种，在此致谢！

收稿日期 2014-10-09

利用纯培养技术从土壤、活性污泥、海水、湖水、沉淀物等自然界中分离到的微生物只占微生物总数的0.01%～10.00%，尚有90%以上的微生物处于未培养或活的但非可培养[1]状态而未被广泛认知。随着现代生物技术的发展，多种分子生物学研究方法为认识更多的VBNC状态菌提供了可能[2]。……