郭磊 詹亚光 范桂枝

摘要 [目的]建立一套适合白桦悬浮细胞蛋白质组学分析的双向电泳体系。[方法]以白桦悬浮细胞为研究对象，采用改进的三氯乙酸（TCA）-丙酮沉淀法提取悬浮细胞蛋白，使用17 cm、pH 4.0～7.0的IPG胶条，9.0 μg/μl的上样量进行双向电泳。[结果]可得到蛋白质点数目多、分辨率高和重复性好的双向电泳图谱。PDQuest软件分析考马斯亮蓝染色后的凝胶，共得到约1 000个蛋白点。从这些蛋白点中随机选取3个蛋白点经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 （MALDI-TOF MS） 分析后，搜索NCBInr 数据库对蛋白进行鉴定。结果显示，这3个蛋白分别为S-腺苷甲硫氨酸合成酶、transposase for IS1330和PadR家族转录调控蛋白。[结论] 为利用蛋白组学分析诱导子提高次生代谢物的积累机制奠定基础。

关键词 白桦;蛋白组学;悬浮细胞

中图分类号 S188;Q943 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）33-11638-03

Establishment of Proteomic Analysis of Suspension Cells in Betula platyphylla Suk.

GUO Lei， ZHAN Ya-guang， FAN Gui-zhi*

（College of Life Science， Northeast Forestry University， Harbin ，Heilongjiang 150040）

Abstract [Objective] To establish a two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis （2-D PAGE） system for suspension cell proteomic analysis of Betula platyphylla.[Method]the improved acetic acid （TCA） -acetone precipitation method was applied for suspension cell protein isolation and purification， and the key technologies of electrophoresis including the sample loading quantity and types of IPG strip were optimized. [Reault]The results indicated that the reproducible 2-D gel with more spots and high resolution electrophoresis diagram could be obtained by using the improved TCA-acetone precipitation method， with 9.0 μg/μl of loading protein sample on 17 cm IPG strip with pH 4-7. About 1 000 protein spots were obtained by PDQuest software analysis. 3 randomly selected protein spots were used to identify by matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry （MALDI TOF MS）. The identified 3 proteins were S-S-adenosylmethionine synthetase， transposase for IS1330 and transcriptional regulatory proteins of PadR family， respectively. [Conclusion] The study laid the foundation for using proteomics analysis inducer to improve secondary metabolites accumulation mechanism.

Key words Betula platyphylla Suk.; Proteomics; Suspension cell

基金項目 东北林业大学本科生创新项目“桑黄发酵产物中甾醇类物质的质量控制技术（20140225107）。

作者简介 郭磊（1993- ），男，山西常治人，本科生，专业：生物技术。*通讯作者，副教授，博士，从事生物工程研究。

收稿日期 2014-10-20

近年来研究表明，白桦（Betula platyphylla Suk.）三萜具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、降脂、利胆和保肝等作用，特别是白桦酯醇、白桦酯酸等三萜物质作为天然药物在抗肿瘤和抗HIV等活性上显示出与以往药物不同的作用机制，靶向作用性更强，几乎无不良反应等特点[1-3]。因此，白桦三萜作为药物化学中的先导化合物而逐步受到研究者的注视。

前期研究表明，白桦酯醇和齐墩果酸等三萜物质可以在白桦愈伤组织和悬浮细胞中积累，但质量分数极低[4-5]。……