APP下载

RP-HPLC-DAD法初步考察5种化合物对照品的稳定性

2014-10-17顾志荣丁军霞王亚丽孙宇靖

应用化工 2014年8期
关键词:甲醇溶液藁本丁烯

顾志荣,丁军霞,王亚丽,孙宇靖

(1.甘肃中医学院药学院,甘肃 兰州 730000;2.甘肃中医学院 当归研究所,甘肃 兰州 730000)

阿魏酸、正丁基苯酞、Z-藁本内酯、正丁烯基苯酞以及亚油酸是中药分析及植物成分分析中常见的5种化合物[1]。其中,正丁基苯酞、Z-藁本内酯以及正丁烯基苯酞属内酯类化合物,均为油状,易通过氧化、水解、光解和异构化等发生结构改变[2]。这些化合物集中分布在伞形科植物中,特别在藁本属(Ligusticum)植物中几乎均含有,具有扩血管、镇痛、解痉、平喘及抗肿瘤等多重作用[3]。阿魏酸是重要的植物酚酸类成分,是植物细胞壁中与多糖和木质素交联的部分,是当归、川芎、阿魏、升麻等多种常用中药的主要有效成分,具有抗氧化、清除自由基以及抗紫外线等作用,广泛应用于医药、保健品、化妆品、农药和食品添加剂等方面[4]。但阿魏酸在水中稳定性差,见光易分解,易与阿魏酸松柏酯相互转化[5]。亚油酸是人体无法合成的必须脂肪酸,其不饱和键具有降低血清胆固醇的作用[6],其铝盐广泛用于制造油漆、涂料等,但其在空气中易发生自氧化。由于这5种化合物常温下在空气中均不稳定,因此给标准物质的制备及成分定性定量检测带来很大困难。

目前,对这5种化合物稳定性的考察笔者未见报道,本研究采用RP-HPLC-DAD法研究5种对照品的甲醇混合溶液的稳定性。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

对照品阿魏酸(中国药品生物制品检定所,批号131187-100504);正丁基苯酞(批号342-12-11)及亚油酸(批号245-12-06)来自美国迪玛公司;正丁烯基苯酞(批号2546-06-4)及Z-藁本内酯(批号2456-03-2)为天津一方科技有限公司产;甲醇,色谱纯;超纯水(自制,电阻率≥18.2 MΩ·cm)。

Agilent 1100 LC/DAD系统(G1312A二元梯度洗脱泵;G1315B DAD检测器;Agilent化学工作站;G1313A进样器;G1316A柱温箱);BT1250型电子天平;KQ-500DE超声波清洗器。

1.2 供试品混合溶液的配制

分别精密称取阿魏酸、正丁基苯酞、Z-藁本内酯、正丁烯基苯酞、亚油酸对照品适量,加甲醇制成质量浓度分别为420,860,686,1 000,680 μg/mL 的混合对照品溶液。分别精密吸取上述溶液各1 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀即得。

1.3 色谱条件

Waters X-Bridge C18(250 mm × 4.6 mm,5 μm)色谱柱;流动相为甲醇(B)-水(A),梯度洗脱条件见表1;体积流量0.8 mL/min,检测波长:阿魏酸、正丁基苯酞、Z-藁本内酯及正丁烯基苯酞280 nm,亚油酸206 nm。柱温30℃,进样体积10μL。

2 结果与讨论

2.1 色谱行为

在1.3节色谱条件下,精密吸取混合供试品甲醇溶液10μL进样,色谱图见图1。

图1 5种化合物的HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of 5 chemical compounds

由图1可知,阿魏酸、正丁基苯酞、正丁烯基苯酞、Z-藁本内酯、亚油酸的保留时间分别为11.177,21.753,33.718,34.067 min 和 34.396 min,分离度均大于1.5,理论板数(按阿魏酸色谱峰计算)不低于5 000。

2.2 12 h内稳定性考察

精密吸取混合供试品甲醇溶液10μL,按1.3节色谱条件每隔2 h进样1次,连续进样6次,结果见表2和图2。

表2 5种化合物12 h内峰面积的变化Table2 Peak area change of 5 chemical compounds in 12 h

由图2可知,5种化合物在甲醇溶液中于12 h内均稳定,但色谱图的基线越来越不平稳。由表2可知,5种化合物在甲醇溶液中于12 h内色谱峰面积基本稳定,RSD均小于2.0%。由此可知,5种对照品混合物的甲醇溶液12 h内稳定性较好,测试时不需新鲜配制。

图2 5种化合物12 h内的HPLC色谱图Fig.2 HPLC chromatograms of 5 chemical compounds in 12 h

2.3 4 d内稳定性考察

精密吸取混合供试品甲醇溶液10μL,按1.3节色谱条件每天(白天测定)进样3次,每次间隔4 h,连续测定4 d(实验室温度17.4 ~ 21.8℃,相对湿度55% ~64%),结果见图3和表3。

由图4可知,5种化合物在甲醇溶液中于2 d内及第3 d前8 h内均稳定,但色谱图的基线随放置时间的增加越来越不平稳。从第3 d后4个小时开始,混合供试品开始出现分解,分解所得物质的色谱峰分别为a、b及c,至第4 d全面分解,分解所得物质的色谱峰为a~g。化合物分解后的HPLC图谱杂峰较多,噪声较大,基线不平稳。

表3 5种化合物4 d内峰面积的变化Table3 Peak area change of 5 chemical compounds in 4 d

由表3可知,正丁烯基苯酞和亚油酸4 d内色谱峰面积基本稳定,RSD均小于3.0%,而阿魏酸、正丁基苯酞以及Z-藁本内酯4 d内色谱峰面积的变化较大,RSD均大于6.0%,且峰面积呈减少趋势,因此推测4 d内分解的对照品可能为阿魏酸、正丁基苯酞以及Z-藁本内酯,但分解的途径及产物需要作进一步研究。由上述分析可知,5种对照品混合物的甲醇溶液在2 d内(亦可为56 h内)稳定性较好,不需新鲜配制,超过56 h则需新鲜配制。

1,2,3 d表示当日第2次进样所得图谱;3 d(3)表示第3 d第3次进样所得图谱;4 d(1)表示第4 d第1次进样所得图谱。

图3 5种化合物4 d内的HPLC色谱图Fig.3 HPLCchromatograms of 5 chemical compounds in 4 d

2.4 精密度考察

精密吸取混合供试品甲醇溶液10μL,按1.3节色谱条件连续进样6次,结果阿魏酸、正丁基苯酞、正丁烯基苯酞、Z-藁本内酯以及亚油酸峰面积的RSD 分别为 0.81%,1.13%,1.39%,0.54%,1.90%;保留时间的 RSD 分别为 0.89%,0.93%,0.73%,1.05%,2.03%。结果表明,该仪器及方法日内运行精密度良好。

3 结论

(1)阿魏酸、正丁基苯酞、正丁烯基苯酞、Z-藁本内酯以及亚油酸对照品混合物的甲醇溶液于56 h内稳定性较好,不需新鲜配制,超过56 h则需新鲜配制。

(2)对照品混合物从第3 d后4个小时开始出现分解,分解的对照品可能为阿魏酸、正丁基苯酞以及Z-藁本内酯。

[1] Qian Y Y,Wang Y L,Sa R N,et al.Metabolic fingerprinting of Angelica sinensis during growth using UPLC-TOFMS and chemometrics data analysis[J].J Chem Centr,2013(7):42-47.

[2] 魏玉平,刘俊,廖杰,等.GAP基地川芎药材中苯酞类成分的监测[J].中国药学杂志,2004,39(11):817.

[3] 左爱华,王莉,肖红斌.洋川芎内酯A和洋川芎内酯I的降解产物研究[J].中草药,2012,43(11):2127-2131.

[4] 郑妍,朱利民.酚酸类化合物的应用及改性研究新进展[J].应用化工,2007,36(9):918-921.

[5] 李韶菁,张迎春,苏培瑜,等.阿魏酸松柏酯的研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(3):229-231.

[6] 张春娥,张惠,刘楚怡,等.亚油酸的研究进展[J].粮油加工,2010(5):18-21.

猜你喜欢

甲醇溶液藁本丁烯
聚丁烯-1合金的制备与性能研究进展
水果罐头中合成着色剂前处理方法的比较
拟藁本属及近缘物种中国分类群花粉形态与质体基因组系统发育研究
国内1-丁烯产能及生产工艺研究
辽藁本的栽培技术
MTO装置副产C4制丁烯-1工艺研究
羟基/乙基/羧基螺吡喃衍生物的合成及其光谱性能研究
2种PRODAN衍生物分子激发态氢键的理论计算
聚丁烯异相成核发泡行为的研究
伞形科藁本属20种植物的果实特征及其分类学意义