铁络合光度法测定氧氟沙星和诺氟沙星含量

2014-10-11潘自红李青彬王亚波李慧芳孟焕新

化学研究 2014年4期

潘自红，李青彬，王亚波，李慧芳，邱晓，孟焕新

（平顶山学院化学化工学院－环境化学重点实验室，河南平顶山467000）

氧氟沙星，（±）－9－氟－2，3－二氢－3－甲基－10－（4－甲基－1－哌嗪基）－7－氧代－7H－吡啶并［1，2，3－de］－4－苯并噁嗪－6－羧酸和诺氟沙星，1－乙基－6－氟－1，4－二氢－4－氧代－7－（1－哌嗪基）－3－喹啉羧酸，是两个重要的合成氟喹诺酮类（FQ）衍生物，均具有广谱抗菌作用，尤其对需氧革兰阴性杆菌的抗菌活性较高，因而在临床分析上应用较为广泛.

目前，已报道的氧氟沙星和诺氟沙星的测定方法主要有高效液相色谱法［1－2］，电化学分析法［3－6］、流动注射化学发光分析法［7－8］、毛细管电泳分析法［9－10］、荧光光谱分析法［11－12］和散射光谱分析法［13－14］等.喹诺酮类药物分子具有大的共轭体系，且含有相邻的羧基和酮基，易与金属离子形成络合物［15］，以及氟喹诺酮药物氧氟沙星和诺氟沙星可与铁（III）反应生成橙黄色络合物，引起反应体系吸收光谱的变化，由此作者建立了分光光度法测定药物制剂中的氧氟沙星和诺氟沙星含量的新方法.

1 实验部分

1.1 仪器及试剂

UV－2550型双光束紫外可见分光光度计（日本岛津分光公司）；722s型可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；CS－501型超级恒温仪（重庆实验设备厂）.

氧氟沙星和诺氟沙星（中国生物制品研究所，北京）：用3%乙醇溶解，配成400mg／L标准储备液（4℃时避光保存），分析时用水逐级稀释至所需浓度.硫酸铁铵溶液（天津市科密欧化学试剂有限公司）：准确称取6.027 5g硫酸铁铵溶于1.0mL 18.0mol／L的浓硫酸中并稀释至500mL，即得到0.025mol／L Fe（III）的0.036mol／L的硫酸溶液.硫酸溶液：取5.0mL 18.0mol／L浓硫酸稀释至500mL，配成浓度为0.18 mol／L的硫酸溶液.用时稀释为所需浓度的工作液.所用试剂均为分析纯.

1.2 实验方法

准确移取7.00mL 0.025mol／L硫酸铁铵溶液加入25mL容量瓶中，然后依次加入2.00mL 0.18mol／L硫酸溶液，适量的氧氟沙星或诺氟沙星标准溶液或样品溶液，用水稀释至刻度线，摇匀，用1cm比色皿，以试剂空白溶液为参比液，在436nm处测其吸光度.

2 结果与讨论

2.1 吸收光谱

按分析步骤配制溶液，测试其吸收光谱，结果见图1.硫酸铁铵溶液在430～600nm范围内没有吸收，但微量氧氟沙星或诺氟沙星与硫酸铁铵络合成稳定的橙黄色配合物，其最大吸收波长位于436nm.为消除试剂干扰，以空白试剂为参比，于436nm处测量生成物的吸光度.

图1 体系的吸收光谱Fig.1 Absorption spectra of the system

2.2 条件优化

2.2.1 反应时间及体系的稳定性

考察了反应时间对两种药物测定体系吸光度的影响.结果表明，在室温及最佳反应条件下，吸光度在所有溶液完全混合后即可达到稳定，且至少能稳定30min以上，满足定量测定的要求.

2.2.2 铁（III）溶液用量的影响

考察了铁（III）溶液用量对体系吸光度的影响.实验发现，随着铁（III）溶液用量的增加，生成络合物的量也增加，反应体系的吸光度也随之增大.当铁（III）溶液用量大于7.00mL时，吸光度最大且基本恒定.故实验确定0.025mol／L硫酸铁铵的用量为7.00mL.

2.2.3 硫酸用量的影响

在铁（III）溶液用量最优化的条件下，考察了加入不同量的硫酸对体系吸光度的影响，发现硫酸浓度对方法的灵敏度几乎没有影响.为稳定体系的酸度，实验确定0.18mol／L硫酸的用量为2.00mL.

2.2.4 温度的影响

考察了温度对体系吸光度的影响.按照实验方法配制成待测溶液，分别放置在室温（20℃）、30、40、50、60、70、80℃恒温水槽中10min，然后冷却至室温测定.实验表明，不同温度下，短时间加热对体系吸光度影响不明显，故实验选择在室温条件下操作.

2.3 干扰研究

分析了几种常见离子对64.0mg／L的氧氟沙星和诺氟沙星测定的干扰情况.结果发现，当控制测量误差在±5%左右，在氧氟沙星测定时，共存物质允许存在的浓度（mg／L）为：Cu2＋（1 536），Al3＋（1 080），Mg2＋、Na＋（380），蔗糖（2 738），Zn2＋（896），甘氨酸（600），K＋（650），Mn2＋（440）；在诺氟沙星测定时，共存物质允许存在的浓度（mg／L）为：Cu2＋（1 024），Al3＋（432），Mg2＋（288），Na＋（920），蔗糖（2 738），Zn2＋（1 040）甘氨酸（600），K＋（1 560），Mn2＋（440），Li＋（280）.由此可见，共存物质均允许以较高的浓度存在.

2.4 工作曲线、检出限和精密度

配置药物的标准溶液，分别测定其吸光度，然后以吸光度为纵坐标，以药物的浓度为横坐标作图.结果表明，氧氟沙星和诺氟沙星的浓度分别在2.24～192mg／L和8.0～248mg／L范围内与体系的吸光度呈良好的线性关系，其线性回归方程分别为：氧氟沙星，A＝0.009 06＋0.005 7c（c，mg／L，r＝0.999 3）；诺氟沙星，A＝0.001 23＋0.003 04c（c，mg／L，r＝0.999 8），方法的检出限分别为0.41和0.76mg／L.对浓度为64.0mg／L的氧氟沙星或诺氟沙星平行测定11次，其相对标准偏差分别为0.6%和0.8%.

2.5 络合物组成测定

配置5.0×10－4mol／L的Fe（III）溶液、氧氟沙星溶液及诺氟沙星溶液，固定Fe（III）的用量，应用饱和法及保持铁（III）和药物溶液的总体积为10.00mL，采用等摩尔连续变换法分别测定了氧氟沙星或诺氟沙星和铁（III）的络合物的组成比.两种方法的测定的药物与Fe（III）的络合比均为2∶1.

2.6 样品分析

为了评价该分析方法的可靠程度及实际应用价值，按照实验步骤分别测定了市售药物制剂中氧氟沙星和诺氟沙星的含量.分别取不同厂家的氧氟沙星或诺氟沙星的胶囊或片剂适量，准确称取相当于主成分200 mg，用3%乙醇定容于500mL容量瓶中.过滤，取适量中段滤液，按实验方法和药典法［16］进行测定，同时进行加标回收实验，结果列于表1中.由表1可见，实验结果令人满意.

表1 药物制剂中氧氟沙星和诺氟沙星含量及回收率测定（n＝6）Table 1 The determination of ascorbic acid in pharmaceutical samples

3 结论

利用酸性介质中，氧氟沙星和诺氟沙星能与三价铁离子形成橙黄色配合物的特性，建立了测定药物中氧氟沙星和诺氟沙星的新方法.考察了分光光度法测定药物的影响因素及适宜的反应条件，测定了药物制剂中相应药物的含量.所建立的方法灵敏度高、仪器设备简单、操作简便快速，可用于实际样品的测定，为其进一步在临床方面的应用奠定了基础.

［1］BYRRO R M D，FULGENCIO G O，CUNHA J A S，et al.Determination of ofloxacin in tear by HPLC－ESI－MS／MS method：Comparison of ophthalmic drug release between a new mucoadhesive chitosan films and a conventional eye drop formulation in rabbit model［J］.J Pharmac Biomed Anal，2012，70：544－548.

［2］焦更生，曹慧兰.高效液相色谱法测定药物制剂中诺氟沙星［J］.理化检验－化学分册，2008，44（1）：88－89.

［3］吴芳辉，朱静，何孝军.定向碳纳米管修饰电极测定氧氟沙星［J］.应用化学，2008，25（7）：792－795.

［4］张淑敏，赫春香，姜佳一，等.诺氟沙星－锰络合体系的单扫描极谱法研究［J］.分析化学，2004，32（3）：332－334.

［5］杨雪娟，何晓英，范向明，等.氧氟沙星在乙炔黑修饰电极上的电化学行为及测定［J］.化学研究与应用，2012，24（2）：287－290.

［6］习霞，明亮，曹靖，等.多壁碳纳米管修饰电极测定诺氟沙星［J］.化学试剂，2009，31（4）：267－270

［7］廖素兰，谢增鸿.流动注射化学发光法测定诺氟沙星［J］.光谱学与光谱分析，2005，25（12）：1938－1942.

［8］马红燕，郑行望，章竹君.流动注射电化学发光分析法测定诺氟沙星的研究［J］.分析化学，2004，32（3）：857－860.

［9］苏彩娜，康艳辉，邓必阳.毛细管电泳－电致化学发光测定诺氟沙星的研究［J］.分析化学，2006，34（9）：135－137.

［10］林伟丰，康信煌，陈缵光，等.毛细管电泳法测定氧氟沙星及左氧氟沙星在其制剂中的含量［J］.中国抗生素杂志，2005，30（12）：756－758.

［11］杜黎明，傅密，杜雅琴.诺氟沙星荷移络合物的荧光特性和应用［J］.分析化学，2005，33（3）：381－384.

［12］马红燕，齐广才，陈小利，等.氧氟沙星－铝－十二烷基苯磺酸钠荧光体系测定氧氟沙星的研究［J］.分析测试学报，2007，26（2）：242－244.

［13］杨志洁，赵慧春，丁芬，等.银纳米敏化铽－诺氟沙星荧光和二级散射的研究与应用［J］.光谱学与光谱分析，2007，27（12）：2534－2537.