王 林，李 波，耿智敏#，徐之超，陈 晨，李文智，郑见宝

1)西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科 西安 710061 2)西安交通大学医学院第一附属医院普通外科 西安 710061

肝纤维化系指肝组织内细胞外基质(extracellualr matrix，ECM)过度增生与异常沉积，最终导致肝脏结构和功能异常的病理变化，进而发展为肝硬变[1]。肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)的持续激活是肝纤维化发生发展过程中的关键环节，抑制HSC活化、增殖成为目前阻断、逆转肝纤维化的重要策略。索拉菲尼作为一种多靶点、多激酶抑制剂靶向治疗药物，能明显抑制HCC细胞增殖及血管新生[2]，但其对 HSC有无作用，此方面研究较少。该研究通过体外实验观察索拉菲尼对HSC活性及活化状态的影响，为索拉菲尼治疗肝纤维化提供新的理论依据。

1 材料与方法

1.1 细胞与试剂 人HSC细胞系(LX2)购自中南大学湘雅中心实验室;索拉菲尼由拜耳公司馈赠，剂型200 mg/片，用体积分数100%DMSO溶解，－20℃保存。α-SMA兔抗人单抗购自美国Abcam公司，β-actin兔抗人单抗购自北京博奥森公司，ERK1/2兔抗人单抗、p-ERK1/2兔抗人单抗、AKT羊抗人单抗、p-AKT羊抗人单抗、兔抗羊二抗、羊抗兔二抗等购自北京中杉金桥生物技术有限公司。TGF-β1和PDGF-BB ELISA检测试剂盒购自美国R＆D公司。

1.2 细胞培养 LX2细胞在37℃、体积分数5%CO2培养箱中培养，培养基为含体积分数10%胎牛血清的DMEM，取对数生长期细胞用于实验。

1.3 MTT法测定索拉菲尼对LX2细胞的增殖抑制率 取LX2细胞，以5×104孔－1的密度接种于96孔板，培养24 h后加入索拉菲尼，药物浓度分别为0(对照)、1、2、5、10、20、50 μmol/L，每种浓度设 3个复孔。加药后分别培养12、24、36、48 h，然后每孔加……