李芳 孔凡志 李旭忠 周联明 张光军 黄忠明 何以丰 张学利

(1.苏州大学研究生院，江苏苏州 215006;2.上海市奉贤区中心医院普外科，上海 201400;3.上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科，上海 200127)

化疗是晚期胃癌的治疗手段之一，然而，多药耐药常导致化疗疗效降低甚至失败。为了克服化疗耐药的问题，抗肿瘤药物常与其他治疗方法(如热疗)联合应用。据报道，热疗在晚期癌症患者中反应良好，热疗可以增加肿瘤对放疗和化疗的敏感性，降低肿瘤细胞的耐药性［1］。目前，国内外关于热疗影响化疗敏感性的机制尚有争议。本研究旨在从细胞水平上观察热疗作用下胃癌细胞株对紫杉醇的敏感性变化。

1 资料与方法

1.1 细胞来源及试剂 胃癌细胞株MKN-45由复旦大学生命科学院遗传开放实验室提供。DMEM/F12培养基购自加拿大Wisent公司;胎牛血清、胰酶购自美国Gibco公司;CCK-8(cell counting kit-8)试剂盒购自上海生博医学生物工程科技公司，逆转录试剂盒购自美国Promega公司;RIPA裂解液Ⅰ购自上海生工生物工程有限公司;多药耐药相关基因(multi-drug resistance gene，MDR1)及 β-actin 引物由美国Invitrogen公司合成。

1.2 主要仪器 聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)扩增仪购自浙江省杭州朗基科学仪器有限公司;酶联免疫检测仪购自美国Bio-Tek公司(型号:ELx800);实时荧光定量 PCR(real-time PCR，RT-PCR)仪购自美国 Applied Biosystems公司。

1.3 方法

1.3.1 引物的合成及 siRNA的设计和合成用Primer Premier 5.0软件设计引物，β-actin上游引物为 5＇-GGCCTCGCTGTCCACCTTCC-3＇，下游引物为 5＇-TCACCTTCACCGTTCCAGTTTTTA-3＇，扩增片段长度为255 bp;MDR1基因上游引物为 5＇-TGCCATAGCTCGTGCCCTTGTTAG-3＇，下游引物为 5＇-TGCGTGCCATGCTCCTTGACTCT-3＇，扩增片段长度为 219 bp。

siRNA由上海吉玛药物有限公司设计并合成。针对MDR1基因选择3个靶点，设……