蔡国平 熊敏 张新潮 刘德昌 桂柯科

(复旦大学附属金山医院骨科，上海 201508)

骨关节炎(osteoarthritis，OA)是最常见的骨关节退行性疾病，多发于老年患者。趋化因子白细胞介素-8(interleukin-8，IL-8)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1，MCP-1)、受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted factor，RANTES)和巨噬细胞炎性蛋白-2(macrophage in-flammatory protein 2，MIP-2)均参与基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)的调控及OA的进程［1］。肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis，TWEAK)可在多种细胞中表达，是一种多功能细胞因子，具有诱导细胞凋亡、促进炎性细胞因子和趋化因子分泌以及细胞增生等生物学效应［2］。本课题组早期研究［3］显示，TWEAK及其受体——成纤维细胞生长因子诱导因子14(fibroblast growth factor inducible 14，Fn14)的mRNA及蛋白表达水平在大鼠OA关节的软骨和滑膜组织中显著升高，它们可能是参与OA的重要细胞诱导因子，且TWEAK能诱导体外培养的大鼠关节软骨细胞和成纤维样滑膜细胞中MMPs的生成。本研究旨在探讨TWEAK是否能促进关节软骨细胞产生趋化因子，从而进一步认识TWEAK在OA中的具体作用机制。

1 资料与方法

1.1 实验动物 清洁级Wistar大鼠2只，8周龄，雌雄各半，体质量(200±30)g，购自上海斯莱克实验动物有限公司。大鼠饲养于通风的清洁级动物房，室温24℃，相对湿度40% ～70%，12 h光照与12 h黑暗循环照明，自由摄食、饮水。

1.2 主要试剂及仪器 0.25%胰酶(上海碧云天生物技术有限公司)，Ⅱ型胶原酶(美国Sigma公司)，胎牛血清(美国 Gibco公司)，细胞培养基DMEM(美国Hyclone公司)，Ⅱ型胶原兔抗鼠抗体(美国Sigma公司)，羊抗兔IgG二抗/FITC标记(上海碧云天生物技术有限公司)，荧光倒置显微镜(日本奥林巴斯公司，CKX31)，待测因子ELISA试剂盒(美国R＆D公司)，重组小鼠TWEAK/TNFSF12蛋白(美国R＆D公司)。……