董长萍，张丹，李生，刘传贵，王兆华

(1.吉林华康药业股份有限公司，吉林 敦化 133700；2.吉林省中医药科学院，吉林 长春 130012)

HPLC测定清胃止痛微丸中盐酸小檗碱和芍药苷的含量

董长萍1，张丹1，李生1，刘传贵1，王兆华2*

(1.吉林华康药业股份有限公司，吉林 敦化 133700；2.吉林省中医药科学院，吉林 长春 130012)

目的：采用高效液相色谱法在不同条件下测定清胃止痛微丸中盐酸小檗碱和芍药苷的含量。方法：盐酸小檗碱检测色谱柱为Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.033 mol·L-1磷酸二氢钾(30∶70)，检测波长为345 nm；芍药苷检测色谱柱为Shim-pack C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.3%磷酸水(12.7∶87.3)，检测波长为230 nm。结果：盐酸小檗碱进样量在0.016～0.080 μg与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 8)，平均回收率为98.68%，RSD=0.74%；芍药苷在进样量0.268～1.340 μg与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9)，平均回收率为99.03%，RSD=0.79%。结论：该方法简便、准确、灵敏，重复性好，可用于清胃止痛微丸的质量控制。

HPLC；盐酸小檗碱；芍药苷；清胃止痛微丸

清胃止痛微丸为中药复方制剂，由黄连、白芍、地榆等5味中药组成，具有清胃泄火，柔肝止痛的功能，用于胃脘痛(消化性溃疡，慢性浅表性胃炎)、火郁证等。现行标准为国家药品标准(试行)WS-415(Z-047)-2001,采用薄层扫描法测定制剂中盐酸小檗碱的含量，因测定误差较大，方法繁琐，不利于产品质量控制，本文改用高效液相色谱法对盐酸小檗碱进行含量测定，同时对制剂中芍药苷进行测定，该测定方法操作简便、结果准确、灵敏度高，能更好地控制产品质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-10 AT高效液相色谱仪(日本岛津公司)；SPD- 10A紫外检测器(日本岛津公司)；KQ-250型超声波处理器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。

1.2 试药

盐酸小檗碱对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110713-201212，含量：99.60%)；芍药苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110736-201237，含量：99.65%)；清胃止痛微丸(吉林华康药业股份有限公司，批号：131001，131002，131003)；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 盐酸小檗碱含量测定

2.1.1 色谱条件色谱柱为Diamonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.033 mol·L-1磷酸二氢钾(30∶70)；流速为1 mL·min-1；检测波长为345 nm；进样量为10 μL；理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5 000。

2.1.2 对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成质量浓度为40.6 μg·mL-1的对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 取清胃止痛微丸适量，研细，精密称定0.1 g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇-盐酸(100∶1)溶液50 mL，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液即得。

2.1.4 阴性对照品溶液的制备 按处方量制备不含黄连的阴性样品，按2.1.3方法制成缺黄连的阴性对照品溶液。

2.1.5 系统适应性与阴性对照试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及缺黄连阴性对照品溶液各10 μL，按2.1.1色谱条件分析，供试品溶液色谱中，盐酸小檗碱的保留时间为12.6 min，而阴性对照品溶液在此保留时间无干扰。见图1。

A.盐酸小檗碱对照品 B.样品 C.缺黄连的阴性对照品 1.盐酸小檗碱图1 盐酸小檗碱、清胃止痛微丸及阴性对照品HPLC图

2.1.6 线性关系考察 分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液4，8，12，16，20 μL，注入高效液相色谱仪中进行分析，以峰面积(Y)对盐酸小檗碱进样量(X)进行回归，得盐酸小檗碱回归方程为Y=1 649 384.534X-2 068.077，r=0.999 8，表明盐酸小檗碱在0.016～0.080 μg线性关系良好。

2.1.7 精密度试验 精密吸取供试品溶液(批号：131001)，重复进样6次，按2.1.1色谱条件测定盐酸小檗碱的峰面积，计算峰面积的RSD=0.32%，表明精密度良好。

2.1.8 稳定性试验 精密吸取供试品溶液(批号：131001)，分别于0，2，4，6，8 h进样测定，记录峰面积，计算盐酸小檗碱峰面积的RSD=0.39%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.1.9 重复性试验 取同一批清胃止痛微丸(批号：131001)6份，按2.1.3方法操作，制得供试品溶液，按2.1.1色谱条件进行测定，计算盐酸小檗碱平均质量分数为17.86 mg·g-1，RSD=1.53%，表明方法重复性良好。

2.1.10 加样回收率试验 精密称取已知含量的清胃止痛微丸(批号：131001，盐酸小檗碱质量分数为17.86 mg·g-1)研细粉末0.05 g，分别加入样品实际含量80%、100%、120%的盐酸小檗碱对照品，按2.1.1测定，结果见表1。

表1 清胃止痛微丸中盐酸小檗碱加样回收率试验

2.2 芍药苷含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱为Shim-pack C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.3%磷酸水(12.7∶87.3)；流速为1 mL·min-1；检测波长为230 nm；进样量为10 μL；理论板数按芍药苷峰计算应不低于3 000。

2.2.2 对照品溶液的配制 精密称取在五氧化二磷干燥器中减压干燥36 h的芍药苷对照品适量，加甲醇制成67 μg·mL-1的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取清胃止痛微丸适量，研细，精密称定0.4 g，置具塞锥形瓶中，加甲醇30 mL，称定重量，超声处理20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性对照品溶液的制备 按处方量制备不含白芍的阴性样品，按2.2.3项下方法制成缺白芍的阴性对照品溶液。

2.2.5 系统适应性与阴性对照试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及缺白芍阴性对照溶液各10 μL，按2.2.1色谱条件进行色谱分析，供试品溶液色谱中，芍药苷的保留时间为15.5 min，而白芍阴性对照溶液在此保留时间无干扰。见图2。

A.芍药苷对照品 B.样品 C.缺白芍的阴性对照品 1.芍药苷图2 芍药苷、清胃止痛微丸及阴性对照品HPLC图

2.2.6 线性关系考察 分别精密吸取芍药苷对照品溶液4，8，12，16，20 μL，注入高效液相色谱仪中进行分析，以峰面积(Y)对芍药苷进样量(X)进行回归，得芍药苷回归方程为Y=667 341.663X-19 706.319，r=0.999 9，表明芍药苷在0.268～1.340 μg峰面积线性关系良好。

2.2.7 精密度试验 精密吸取供试品溶液(批号：131001)重复进样6次，按2.2.1色谱条件测定芍药苷的峰面积，测得其峰面积的RSD=0.82%，表明仪器精密度良好。

2.2.8 稳定性试验 精密吸取供试品溶液(批号：131001)，分别于0，2，4，6，8 h进样测定，记录峰面积，测得芍药苷峰面积的RSD=0.91%，供试品溶液在8 h内稳定。

2.2.9 重复性试验 取同一批号清胃止痛微丸(批号：131001)6份，按2.2.3方法操作，制得供试品溶液，按2.2.1色谱条件测定，芍药苷平均质量分数为4.38 mg·g-1，RSD=1.17%，表明重复性良好。

2.2.10 加样回收率试验 精密称取已知含量的清胃止痛微丸(批号：131001，芍药苷质量分数：4.38 mg·g-1)研细粉末0.2 g，分别加入样品实际含量的80%、100%、120%芍药苷对照品，按2.2.1方法测定，结果见表2。

表2 清胃止痛微丸中芍药苷回收率试验

2.3 样品测定

取3批清胃止痛微丸样品，按2.1盐酸小檗碱含量测定方法，分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定并计算盐酸小檗碱的质量分数，测定结果见表3。

表3 清胃止痛微丸中盐酸小檗碱和芍药苷的测定(n=3) mg·g-1

取3批样品，按2.2芍药苷含量测定方法，分别精密吸取芍药苷对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定并计算芍药苷的质量分数，测定结果见表3。

3 讨论

取盐酸小檗碱对照品的甲醇溶液，于200～400 nm处进行扫描，结果发现有3个吸收峰(230，265，345 nm)，确定盐酸小檗碱检测波长为345 nm。另取芍药苷对照品溶液进行扫描，确定芍药苷检测波长为230 nm。

盐酸小檗碱的HPLC含量测定方法较多[1-4]，流动相有乙腈-甲醇、水、冰醋酸等系统。笔者经试验摸索，采用乙腈-磷酸二氢钾系统为流动相，色谱分离效果较为满意，分离度及峰形对称性较好。

芍药苷的HPLC含量测定方法较多[5-6]，流动相多采用乙腈-磷酸水系统。笔者经试验摸索，采用乙腈-0.3%磷酸流动相系统，分离效果较理想。

实验建立的清胃止痛微丸中盐酸小檗碱和芍药苷含量测定方法简便、准确、灵敏，重复性好，可用于该制剂的质量控制。

[1] 黄新兴，赵秀艳.HPLC测定消渴灵中盐酸小檗碱含量测定[J].中国中医药现代远程教育，2011，9(5)：186.

[2] 姜启娟，孙仁爽，张栋.HPLC测定疗癣卡西甫散中盐酸小檗碱的含量[J].中国中医药现代远程教育，2011，9(1)：215.

[3] 叶秀金，宋粉云.HPLC测定清肺抑火丸中盐酸小檗碱的含量[J].中国实验方剂学杂志，2011，17(3)：90.

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DeterminationofBerberineHydrochlorideandPaeoniflorininQingweizhitongPelletbyHPLC

DONG Changping1，ZHANGDan1，LISheng1，LIUChuangui1，WANGZhaohua2*

(1.JilinHuakangStockLimitedCompanyofMedicines，Dunhua133700，China；2.AcademyofChineseMedicalSciencesofJilinProvince，Changchun130012，China)

Objective：To determine the content of berberine hydrochloride and paeoniflorin in Qingweizhitong pellet by high performance liquid chromatography in different conditions.Methods：The determination for berberine hydrochloride was conducted by Diamonsil-C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm).The mobile phase was acetonitrile-0.033 mol·L-1potassium phosphate monobasic(30∶70 for volume).The detection wavelength was 345 nm.The determination for paeoniflorin was conducted by Shim-pack C18(150 mm×4.6 mm，5 μm).The mobile phase was acetonitrile-0.3% phosphoric acid(12.7∶87.3 for volume).The detection wavelength was 230 nm.Results：Good linear relationship between area and amount was noted in the range of 0.016-0.080 μg for berberine hydrochloride with a correlation coefficient of 0.999 8.The average recovery of berberine hydrochloride was 98.68%，and the RSD was 0.74%.Good linear relationship between area and amount was noted for 0.268-1.340 μg for paeoniflorin with a correlation coefficient of 0.999 9.The average recovery of paeoniflorin was 99.03%，and the RSD was 0.79%.Conclusion：The established method is simple，accurate，sensitive and good repeatability，which can be applied for the quality control of Qingweizhitong pellet.

HPLC；Berberine hydrochloride；Paeoniflorin；Qingweizhitong pellet

2014-07-07)

*

王兆华，主任药师，研究方向：中药新药与新制剂；Tel：(0431)86058659，E-mail：wangzhaohua221@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.12.015