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雪莲果试管苗快繁技术研究

2014-09-24吴亚京蔡雁平

湖南农业科学 2014年15期
关键词:腋芽成苗茎段

吴亚京,艾 辛,蔡雁平

(1.湖南农业大学园艺园林学院,湖南 长沙410128;2.株洲县农业局,湖南 株洲412100)

雪莲果(Smallanthus Sonchifolius(Poepp.End1.)H.Robinson)属菊科多年生草本块根作物,起源于从智利的中北部到秘鲁、厄瓜多尔的南美洲安第斯山脉的中高原地带[1],2004年开始引入云南省嵩明县栽培[2]。雪莲果块根形如甘薯,皮薄汁多,果肉如雪梨,晶莹剔透,香甜脆爽,生熟可食,含有较高果寡糖(低聚糖),这种糖在人体内不能被代谢,因此,有可能以饮食疗法预防和治疗糖尿病[3-4],是一种既可作水果、蔬菜食用,又具有药用价值的保健植物。国内有关雪莲果的研究报道多集中于引种、栽培、营养成分及功能分析等方面[5-6],关于雪莲果种苗繁殖方面的研究较少。由于雪莲果栽培上采用块茎繁殖,因此易患病毒病和存在种性退化问题[7]。应用组织培养技术可快速繁殖种苗,实现大面积栽培,同时通过茎尖分生组织培养可获得脱毒苗,解决种性退化问题。曾慎等对雪莲果离体快繁[8]、试管苗移栽成活因素[9]、组培脱毒[7]等进行了初步研究。刘德江[10]等人研究了雪莲果叶片愈伤组织的诱导,获得了对茎段形成芽、对再生植株诱导成根效果较好的培养基配方,但对愈伤组织的再分化成芽没有获得成功。马杰,崔波[11]等人对雪莲果幼嫩叶片和腋芽离体培养与植株再生过程进行了研究,在短时间内完成从诱导到再生植株形成的整个过程,实现了该植株再生体系的建立,该体系的建立大大加快了育苗进程,对雪莲果种苗快速繁殖和规模化生产有着重要的指导意义。本试验在前人研究的基础上,以雪莲果带腋芽的茎段为外植体材料探讨激素(NAA、IBA和2,4-D)种类和浓度对雪莲果快速繁殖的效果,为建立雪莲果无毒种苗快繁技术提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验材料为栽种于湖南农业大学智能温室的雪莲果苗。取生长健壮带腋芽的茎段为试验材料。将外植体用洗衣粉水浸泡3~5min,再用清水(自来水)漂洗10~15min,然后在超净工作台无菌状态下用75%酒精(V/V)表面灭菌30s,用无菌水漂洗3次,再用0.2%升汞溶液消毒5~7min,最后用无菌水漂洗4次。

1.2 培养基的配制

以MS为基本培养基,添加不同种类和浓度水平的生长素物质(IBA、NAA、2,4-D如表1),培养基中附加蔗糖(30g·L-1)+琼脂(6g·L-1),将培养基PH值调至

5.8~6 .0。

1.3 外植体培养

无菌条件下,将消毒后的雪莲果切成长约1.0cm带单腋芽的茎段,接种于不同浓度的培养基中(表1),每组处理接种20个三角瓶,每瓶竖立放4个带腋芽茎段。接种好的外植体放置在温度为(25±2)℃,光照为(白天光照16h,黑暗8h,光照强度约400μmol/(m2·s))的条件下进行培养。适时观察各自的长根和长芽成苗的状况。

取切割好的无菌带腋芽茎段接种在MS+NAA0.1mg·L-1+蔗糖(30g·L-1)+琼脂(6g·L-1)培养基,每瓶分别放5根、10根、15根。接种好的外植体放置在温度为(25±2)℃,光照为(白天光照16h,黑暗8h,光照强度约400μmol/(m2·s))的条件下进行培养。适时观察各自的长根和长芽成苗的状况。

1.4 试管苗的移栽

试管苗完成生根后,将培养瓶放在通风温室内,在自然光照条件下炼苗7~10d后,打开瓶盖,再晾苗3d,然后用水洗去试管苗根部的固体培养基,最后将试管苗移栽到灭过菌的栽培基质(腐质土:珍珠岩=3:1)中。注意遮阴保湿,尤其是在移栽后10d内要做到全天遮阴,晴天时注意喷水。待成活后揭去遮阳网,观察苗的成活率。

2 结果与分析

2.1 生长物质种类和浓度对腋芽茎段成苗的影响

雪莲果茎段腋芽在没有生长物质的刺激的情况下虽然能够成苗,但成苗率低,苗矮小。生长物质都能诱导茎段腋芽萌发成苗,但它们在诱导成苗率、苗生长节数及成苗质量上有差异(结果见图1、表2)。2,4-D 0.15mg·L-1培养基对雪莲果的带腋芽的茎段成苗的效果最好,25d后成苗率达到了95%,平均苗高有6.2cm,平均苗节数有5节,节间长、粗壮,叶片肥厚且宽大(如图1-1)。其次是NAA 0.1mg·L-1培养基(如图1-2),成苗率也达到了82.5%。而IBA对雪莲果的成苗效果不明显(如图1-3),成苗率不足50%,甚至低于对照。从实验结果看,MS+2,4-D 0.15mg·L-1是最佳底色成苗培养基。所有的试管苗叶片都有不同程度的向下卷曲,尤以含2,4-D和NAA的培养基要严重一些,原因可能是与某些微量元素不足有关,有待进一步试验。

表1 生长素类物质种类和浓度

图1 雪莲果的茎段快繁苗

表2 生长物质种类和浓度对雪莲果带腋芽茎段成苗的效果

2.2 生长物质对雪莲果茎段苗生根的影响

雪莲果腋芽茎段分别接入培养基中的生根情况见图2、表3。不管有无生长物质,雪莲果腋芽茎段外植体5~8天内都开始长根,但不同外植体间的生根速度、根长和根数有差异。图2为3种生长物质最佳的浓度的生根情况。表3可知,接种20天后,MS+NAA 0.1mg·L-1和MA+2,4-D 0.15mg·L-1培养基生根率都达到了100%,而MS+IBA 0.1mg·L-1的生根率只达到了52.5%。MS+2,4-D 0.15mg·L-1培养基接种的外植体平均根长6.4cm,根系颜色呈墨绿色且粗壮,MS+NAA 0.1mg·L-1培养基接种的外植平均根长5.0,根系颜色呈黄褐色但细小。从总体的实验结果来看,MS+2,4-D 0.15mg·L-1培养基是最佳的生根培养基。

图2 生长物质对雪莲果茎段快繁根系生长的影响

2.3 单瓶接种腋芽茎段数量对成苗的影响

MS+NAA0.1mg·L-1培养基接种的外植体,5d就开始长根,从长出第一条根开始10d内根系生长较快,平均每天有6.2株长根,之后生根速度缓慢,基本趋于稳定不变。由表4可知,一瓶内接种5株外植体的成苗率最高,达到了80%。其次是一瓶内接种10株,最后是一瓶内接种15株。一瓶内接种多株,形成的苗茎都很细小,叶片也小而薄。一瓶内接种5株比接种10株和15株更有利于成苗,而且一瓶内接种的株数越多,越容易形成玻璃苗,不利于苗的成活,该实验结果与丰锋[12]等的研究结果是一致的。

2.4 试管苗的移栽

试管苗完成生根后,将培养瓶放在通风温室内,在自然光照条件下炼苗7~10d后,打开瓶盖,在自然条件下晾苗3d,然后用温水洗去试管苗根部的固体培养基,最后将试管苗移栽到灭过菌的栽培基质(腐质土∶珍珠岩=3∶1)中。注意遮阴保湿,尤其是在移栽后10d内要做到全天遮阴,晴天时注意喷水。经过20d后,移栽成活率达到了97%,而未炼苗的试管苗成活率只有78.35%。

表3 生长物质种类和浓度对雪莲果带腋芽茎段生根的效果

3 讨论与小结

试验结果表明,雪莲果带腋芽的茎段在没有生长物质的培养基能够萌发成苗,添加NAA、IBA和2,4-D对促进成苗和生根有不同的效果。NAA,2,4-D有一定的促进效果,主要体现在成苗率和根系的发育等方面,其中以2,4-D效果最好。2,4-D浓度为0.15mg·L-1的培养基成苗率也是所有培养基中最高的,25d后成苗率达到了95%。平均苗高有6.2cm,平均苗节数有5节,节间长、粗壮,叶片肥厚而且宽大,植株的整体长势很平稳,有利于植株的成活。其它培养基成苗率虽然达到了80%左右,但植株的总体生长的水平不如3号培养基(2,4-D 0.15mg·L-1)。添加NAA的培养基植株的根细长,添加2,4-D的培养基植株的根长且粗壮。2,4-D浓度为0.15mg·L-1培养基上植株最早开始生根,完成生根时间最短,生根率100%,且根的形态完好,植株成活率也很高。有些培养基生根率虽也达100%,但时间长于20d,或根细长不利于植株成活。IBA则对雪莲果带腋芽茎段的成苗效果不明显,平均的成苗率低于了50%,低于不添加如何生长物质的MS基本培养基的成苗率。综合各项的数据来看,选用MS+2,4-D 0.15mg·L-1+蔗糖(30g·L-1)+琼脂(6g·L-1)作为雪莲果的试管快繁培养基,形成的植株根系完好,成苗率高,成活率高。接种不同数量带腋芽的茎段的试验中,发现接种的越多越不利于成苗,而且容易形成玻璃化苗。所以在培养过程中要注意接种的外植体不能过密,培养温度也不能过高,高温(30℃)会增加玻璃化的发生[12],试管苗要能充分得到光照,同时注意提高容器内的透气性,这样可有效控制玻璃苗的出现[13]。

表4 接种茎段数量对成苗的影响

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