温 娜 唐泽波 金 宏 张 宇 刘兴吉 齐 玲 于洪泉

(吉林医药学院基础医学院，吉林 吉林 132013)

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤，恶性程度高，约占颅内肿瘤的45％〔1〕。血管内皮生长因子(VEGF)是调节肿瘤微血管生成的重要因子之一〔2〕。五味子多糖具有抗肿瘤活性〔3～5〕，但其具体的抗肿瘤作用机制尚不清楚。本课题组前期研究发现五味子多糖可以抑制脑胶质瘤细胞的生长〔6〕。本文将进一步研究五味子多糖对体外培养脑胶质瘤细胞株(SHG-44)细胞VEGF表达的影响，旨在探讨五味子多糖抑制脑肿瘤细胞生长的机制。

1 材料与方法

1.1细胞和主要试剂 SHG-44细胞(吉林大学第一医院神经外科于洪泉主治医师提供)，细胞培养基RPMI-1640 (美国Hyclone公司)，0.25％胰蛋白酶、小牛血清(美国Gibco公司)，五味子多糖(北华大学提供)，VEGF兔抗人多克隆抗体(北京中杉公司)。

1.2SHG-44细胞的培养 从液氮中取出冻存的SHG-44细胞，迅速放入37℃水浴箱中摇动溶解，然后将细胞接种于培养瓶中，加入10 ml含10％小牛血清的RPMI-1640细胞培养液，将其置入37℃、5％CO2及饱和湿度培养箱中培养，隔日换液。

1.3酶联免疫吸附法测定培养细胞上清中VEGF蛋白 将SHG-44细胞用0.25％胰酶消化，24孔培养板中接种细胞悬液，实验分为空白对照组(不含药物)和3个加药组(五味子多糖浓度分别为1.25、2.5、5 mmol/L)，作用48 h，每组设5个复孔，加药期间用含5％小牛血清的RPMI-1640培养基培养细胞。取细胞培养上清，将上清液与包被液按1∶1的比例加入96孔酶标板中(空白对照组为100％包被液)，4℃过夜。封闭后加入VEGF兔抗人多克隆抗体(1∶500稀释)4℃过夜。加入二抗(1∶1 000稀释)，室温孵育2 h，二氨基联苯胺(DAB)显色液室温避光3～5 min，当有颜色变化时加入终止液。……