周 雨 易德保 蒋传命 王 乐 凌 晖

(邵阳医学高等专科学校，湖南 邵阳 422000)

胃癌是我国发病率最高的恶性肿瘤〔1～3〕。干细胞标志物(CD44)及ATP-结合盒亚家族成员2(ABCG2)是常用的研究肿瘤干细胞耐药性的分子标志物，在胃癌组织中的表达与胃癌发生及分化有明显关系。本研究观察40例老年胃癌患者的胃癌组织中CD44和ABCG2蛋白的表达情况，并就两者的相关性进行分析，从而了解CD44和ABCG2与胃癌发生及发展的联系，最终为老年胃癌的早期诊断、治疗效果评价、判断预后的肿瘤标记物提供理论依据。

1 资料与方法

1.1临床资料 老年胃腺癌组织40例来源于邵阳市中心医院及邵阳医专附属医院2008年1月至2009年12月的手术切除标本。其中男28例，女12例，年龄56～78〔平均(64±7.3)〕岁，术前均未接受化疗、放疗等治疗。

1.2试剂来源及试验方法 研究所用试剂包括兔抗CD44抗体、兔抗ABCG2抗体、二氨基联苯胺(DAB)显色剂、免疫组化(SP)试剂盒等，所有试剂均购自Abcam公司及博士德公司。经脱蜡水化及抗原修复后将切片置于3％H2O2中淹没浸泡30 min，磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗5 min 3次，使用10％正常山羊血清，中和非特异性反应，湿盒内放置20 min。滴加1∶1 000比例稀释的CD44抗体及1∶200比例稀释的ABCG2抗体于切片上，置湿盒内，4℃冰箱过夜。取出，室温下放置5 min，PBS洗3 min 3次，吸去水分，滴加二抗工作液，于湿盒内37℃孵育25 min。温度设置为37℃条件下，使用辣根过氧化物酶标记链霉素卵白素工作液，于湿盒内孵育20 min，此切片后经DAB底物显色、苏木素复染以及1％盐酸酒精分化处理后，将切片置于显微镜下观察及照相。计算阳性细胞及阴性细胞比率，分为 “-、+、、”4个等级，分别表示为阳性细胞比率≤10％、 11％～40％、41％～70％、>70％。