复智散对阿尔茨海默病转基因鼠脑神经细胞内神经颗粒素通路的影响

2014-09-13宋冬晶刘新宇王德生

中国老年学杂志 2014年24期

宋冬晶刘斌刘新宇王晔王德生纪勇

(哈尔滨市第二医院，黑龙江哈尔滨 150001)

神经颗粒素(Ng)是特异性神经元突触后膜蛋白，是神经可塑性及学习记忆调控过程中的一个重要蛋白，其基因表达和蛋白质合成主要分布于海马、前额皮层、纹状体和杏仁核〔1〕。作为突触后蛋白激酶(PK)C的作用底物和Ca2+敏感性钙调蛋白(CaM)结合蛋白，Ng主要通过调控Ca2+和CaM依赖性酶包括Ca2+- CaM依赖性蛋白激酶(CaMK)Ⅱ等，参与学习记忆过程〔2～6〕。本文通过观察复智散对转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠脑神经细胞内Ng通路的影响，探讨复智散治疗AD的作用机制。

1 材料与方法

1.1动物及分组 6月龄APP/PS1 双重转基因小鼠，购自南京大学模式动物研究所。正常对照组为15只相同遗传背景同月龄的C57BL/6J小鼠。实验随机分为对照组(蒸馏水23 ml/d)、模型组(蒸馏水23 ml/d)、低剂量组(1.25 g/kg)、中剂量组(2.5 g/kg)、高剂量组(5.0 g/kg)、安理申组(0.54 mg·kg-1·d-1)，各组15只。连续灌胃21 d。

1.2药物复智散(FZS)，哈医大一院王德生教授研发，由人参、节菖、蒲黄芩等八味中草药组方而成。水浸泡40 min，煎煮1 h，过滤出药汁。加水煎煮40 min后再次过滤，将两次滤过的药汁混合，配制成FZS浓度为0.25 g生药/ml的提取液，于4℃保存。安理申(盐酸多奈哌齐)，5 mg/片，购自卫材药业。

1.3Western印迹检测蛋白表达量脑组织剪至约150 mg，加300 μl蛋白质抽提液，匀浆。最高速度漩涡振荡5 s。12 000 r/min，4℃离心5 min。迅速把上清液转移至另外一个预冷的离心管，-20℃保存。加样到96孔板，标准品稀释液调整最终量到20 μl；A570 nm波长下检测OD配平各组蛋白；1∶4的比例加入SDS-PAGE5倍上样缓冲液，水煮，直至蛋白质变性电泳分析。曝光显影。