纪朋艳 田 晶 任 旷 王艳春 齐 玲 刘晓阳

(吉林医药学院基础医学院，吉林 吉林 132013)

脑胶质瘤约占颅内肿瘤的46％，尽管采取手术、放、化疗等方法，恶性胶质瘤患者的中位生存期仍徘徊在1年左右。因此，探索新的更为有效的胶质瘤治疗方法、治疗药物是一热点课题〔1,2〕。氯通道阻断剂应用于临床的前景看好〔3〕。5-硝基-2-(3-苯丙胺)-苯甲酸(NPPB)是常用的氯通道阻断剂，其对大鼠胶质瘤细胞的作用尚不清楚。本研究观察了不同浓度NPPB对体外培养大鼠胶质瘤细胞C6的作用并初步探讨其作用机制，旨在探讨通过阻断氯通道达到控制胶质瘤生长的可能性。

1 材料与方法

1.1细胞系 大鼠脑胶质瘤C6细胞株由吉林大学基础医学院提供。

1.2药物及试剂 NPPB(美国Sigma公司)加入二甲基亚砜(DMSO)配制成终浓度为0.1 mol/L的原液，过滤后-20℃保存备用；四甲基偶氮唑蓝(MTT)购自美国Sigma公司；RPMI-1640购自美国Hyclone公司；胰蛋白酶、小牛血清购自美国Gibco公司；Bax、Bcl-2和半胱氨酸蛋白酶(Caspase)3抗体购自北京中杉公司。

1.3细胞培养 自-80℃冰箱中取出大鼠脑胶质瘤C6细胞迅速置于37℃水浴至融化，离心后小心吸出上清，细胞接种于含10％小牛血清的RPMI-1640培养液中，37℃、5％ CO2，饱和湿度条件下进行培养，倒置显微镜下观察细胞生长良好，待 80％～90％融合时进行传代。

1.4MTT法检测NPPB对C6细胞生长的影响 取对数生长期的C6细胞，0.25％胰蛋白酶消化，用含5％小牛血清的RPMI-1640培养基调细胞浓度至5×104/ml，接种于96孔板，100 μl/孔。37℃、5％CO2温箱内培养24 h，吸弃培养液，药物组分别用浓度为20、40、80、160 μmol/L的NPPB液200 μl处理；阴性对照组和调零组加入5％小牛血清的RPMI-1640培养基200 μl，各设复孔3个。……