王 彭 宋丽娜 师庆红 李玲霞 李洪军 印 璞 赵海丰 郭宏华 何成彦

(佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003)

钙网蛋白(CRT)是内质网和肌浆网中高度保守的主要的Ca2+结合蛋白，能调节细胞多种生理功能，可协助蛋白质正确折叠、修饰，维持细胞Ca2+稳态，参与抗原提呈、调节细胞凋亡等，并与多种疾病的发生、发展和预后相关〔1，2〕。近年来CRT在恶性肿瘤发生、诊断、治疗中的作用逐渐受到重视，在各种恶性肿瘤中的研究也成为热点，但是关于CRT在大肠癌中的研究较少。本文应用液质联用技术研究CRT在大肠癌及癌旁组织中的表达及临床意义。

1 材料与方法

1.1组织标本 收集佳木斯大学附属第一医院20例手术治疗的大肠癌患者的肿瘤组织标本(均经病理学检查证实为腺癌)及各患者距离肿瘤组织边缘10 cm以外的上端癌旁组织标本。患者术前均未接受任何治疗，年龄60～70岁，男14例，女6例。将获得的新鲜标本离体后用生理盐水冲洗干净，放入液氮冷冻，-80℃保存。

1.2主要试剂及仪器 碘代乙酰胺(IAA)、载体两性电解质(Bio-Lyte 3-10)、IPG 预制胶条(pH3～10，17 cm;pH5～8，17 cm)、矿物油、尿素、硫脲、三羟甲基氨基甲烷、3-1〔(3-胆酰胺丙基)-二乙胺〕-丙磺酸、碳酸氢氨、苯甲基磺酰氟购自Bio-Rad公司，丙烯酰胺、 TMED、甘氨酸、十二烷基磺酸钠(SDS)、溴酚蓝、考马斯亮蓝G-250、苯甲基磺酰氟(PMSF)购自Sigma公司，低熔点琼脂糖、甲叉双丙烯酰胺、DTT、TPCK 修饰的测序级胰酶购自普洛麦格公司。过硫酸铵、碳酸氢氨、硝酸银、甲醛、乙醇、硫代硫酸钠、冰乙酸均为国产分析纯。蛋白质定量试剂盒(RC DC Protein A ssay Kit)购于Bio-Rad 公司。液相色谱分析仪购自安捷伦公司，LTQXL离子肼质谱仪购自赛默飞世尔公司。……