沈梅红 沈 洁 舒兆瑞 张 莹 穆艳云 李忠仁

(南京中医药大学第二临床医学院，江苏 南京 210023)

氧化应激学说是缺血性中风的重要机制之一，而电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠具有明显的抗氧应激保护作用〔1〕。红系核因子2(NF-E2)相关因子(Nrf2)目前认为是调控细胞对抗外来异物和氧化损伤的关键转录因子。Nrf2缺失或激活障碍，会引起细胞对应激源的敏感性增高，与细胞凋亡、炎症修复进程延长、化学促癌的发生等病变过程密切相关〔2〕。近来研究发现Nrf2在氧化应激性疾病中起着重要的调控作用，Nrf2的激活可诱导一系列内源性抗氧化酶和抗氧化蛋白上调，参与γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS)的基础性和诱导性表达〔3〕，协同加强细胞清除ROS/RNS的防御系统，维持细胞内的还原电位。但大鼠局灶性脑缺血再灌注后Nrf2表达状态尚未见报道。本研究拟利用大脑中动脉缺血再灌注大鼠模型，采用免疫组化方法观察缺血再灌注损伤后大脑皮层细胞上Nrf2蛋白表达情况，并探索电针干预作用的影响。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1药品与试剂 多聚甲醛 (分析纯，批号：20071217)：购自成都科龙化学试剂厂，用0.01 mol/L PBS缓冲液配成4％浓度备用；一抗(Nrf2兔抗大鼠单克隆抗体)购自美国Santa Cruz公司(批号：K2008，用抗体稀释液1∶150稀释)；二抗及免疫组化测试盒(SABC)购于武汉博士德公司；多聚赖氨酸及DAB显色液等免疫组化辅助试剂购于福州迈新生物技术开发有限公司。

1.1.2实验动物 15只清洁级Sprague Dawley健康雄性大鼠，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司(许可证号：SCXK(沪)2007-0005)，所有大鼠均自由摄食、饮水，生活在昼夜节律为12 h/12 h且保持一定湿度和25℃的空间内。……