张春晓，吴隼，张崇，郭庆合

（1.新乡医学院第一附属医院结核内三科，河南新乡453100；2.新乡医学院第一附属医院血液内科，河南新乡453100；3.新乡医学院药学院，河南新乡453100；4.新乡医学院医学检验学院，河南新乡453100）

母牛分枝杆菌菌苗联合化疗对肺结核患儿的疗效及免疫功能的影响

张春晓1，吴隼2，张崇3，郭庆合4

（1.新乡医学院第一附属医院结核内三科，河南新乡453100；2.新乡医学院第一附属医院血液内科，河南新乡453100；3.新乡医学院药学院，河南新乡453100；4.新乡医学院医学检验学院，河南新乡453100）

目的探讨母牛分枝杆菌菌苗联合化疗对肺结核患儿的疗效以及对患儿免疫功能的影响。方法选取2010年12月至2013年12月在新乡医学院第一附属医院、卫辉市人民医院和卫辉市第三人民医院等三家医院接受治疗的89例肺结核患者，随机分为对照组和观察组。对照组予常规抗结核化疗，观察组在化疗基础上联合母牛分枝杆菌菌苗治疗。2组患儿于治疗前、后抽取外周静脉血，采用流式检测外周血CD4+、CD8+、CD16+CD56+细胞比例以及CD4+/CD8+比值，采用ELISA法检测外周血血清TNF-α和IL-10的水平。取2组患儿每人3份痰标本(夜间痰、清晨痰和即时痰）进行涂片统计2组患儿治疗后结核菌阴转率。结果治疗前，2组患儿各项指标差异比较不具统计学意义。治疗后，观察组组外周血CD4+T淋巴细胞、CD16+CD56+细胞比例以及CD4+/ CD8+比值显著高于治疗前和对照组治疗后(P＜0.05），2组患儿CD8+T淋巴细胞细胞比例均较治疗前显著下降(P＜0.05），组间差异不具统计学意义；治疗后，观察组外周血血清TNF-α和IL-10的水平较治疗前下降且明显高于对照组(P＜0.05）。疗程结束后，对照组40例患儿涂片呈阴性，阴转率为90.9%，观察组45例患儿涂片呈阴性，阴转率为100%，2组患儿阴转率差异比较具有统计学意义(P＜0.05）。结论母牛分枝杆菌菌苗联合化疗对肺结核患儿具有显著疗效，能够显著改善患儿免疫功能。

母牛分枝杆菌菌苗；化疗；肺结核；免疫功能

结核病是严最危害公众健康的全球性公共卫生问题，近年来，全球结核病疫情呈现上升趋势，每年大约超过800万例新增结核病，其中儿童约有130万结核病新增病例，每年约40万～50万患儿死亡［1-3］。我国是全球第二大结核病高发国家，其发病率和病死率始终居我国传染病之首，随着发病率的升高，儿童结核病也出现增加趋势，据不完全统计，我国0～14岁小儿的平均感染率为9.6%［4］。结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，可侵及许多脏器，以肺部结核感染最为常见，人体感染结核菌后不一定发病，当抵抗力降低或细胞介导的变态反应增高时，才可能引起临床发病［5-7］。研究发现，结核病患者外周血淋巴细胞亚群比例失调，证实了结核病患者存在T淋巴细胞免疫功能降低［8］。本研究选取在新乡市三家医院接受肺结核治疗的患儿作为研究对象，探讨母牛分枝杆菌菌苗联合化疗对肺结核患儿的疗效以及对患儿免疫功能的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2010年12月～2013年12月本市新乡医学院第一附属医院、卫辉市人民医院和卫辉市第三人民医院等三家医院收治的4～14岁肺结核病患儿共89例，其中新乡医学院第一附属医院收治13例，男9例，女4例；平均年龄（8.0± 4.4）岁，其中4～7岁2例，8～11岁6例，12～14岁5例；卫辉市人民医院收治10例，其中男6例，女4例；平均年龄（8.7±4.7）岁；4～7岁1例，8～11岁4例，12～14岁5例；卫辉市第三人民医院收治21例，其中男13例，女8例；平均年龄（8.2±3.9）岁；4～7岁1例，8～11岁8例，12～14岁12例；经胃液、痰结核菌检查、PPD试验、血清结核抗体检查确诊为肺结核，所有病例均符合中华医学会儿科分会呼吸学组制定的儿童肺结核临床诊断标准。所有患者均签署知情同意书并受医院伦理委员会监督进行。所有患儿随机分为对照组和观察组，对照组44例，其中男28例，女16例，平均年龄（8.3±4.6）岁，其中4～7岁4例，8～11岁18例，12～14岁22例；观察组45例，其中男28例，女17例，平均年龄（8.2±3.9）岁，4～7岁5例，8～11岁20例，12～14岁20例。2组患儿在性别、年龄等差异无统计学意义，具有可比性。所有患儿均无其他临床并发症。

1.2 治疗方法 对照组患儿给予单纯化疗：异烟肼［10 mg/（kg·d）］、利福平［10 mg/（kg·d）］，呲嗪酰胺［25 mg/（kg·d）］。观察组患儿在对照组基础上给予母牛分枝杆菌菌苗联合治疗：剂量22.5μg/次，与化疗同时使用，深部肌肉注射，每周1次。2个月为1个疗程，2组患儿均治疗2个疗程。2组患儿均予以全程督导管理，并跟踪随访24个月。本实验获得患者知情同意，且经过本院伦理委员会批准。

1.3 检测指标 分别抽取治疗前后2组患儿外周静脉血4mL，分为2份，一份全血用于流式检测外周血CD4+T淋巴细胞、CD8+T、CD16+CD56+细胞比例以及CD4+/CD8+比值；另一份离心取上清采用ELISA法检测血清TNF-α和IL-10的水平，操作严格按照ELISA试剂盒说明书进行。取治疗后患儿3份痰标本（夜间痰、清晨痰和即时痰）进行涂片检查，痰标本应以脓样、干酪样或脓性粘液样性质的痰液为合格标本，痰量应为3～5mL。

1.4 统计方法 所有数据均采用SPSS13.0统计学软件进行分析，正态计量数据用“±s”表示，正态资料组间比较采用t检验，样本率的比较采用卡方检验分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组患儿治疗前后外周血淋巴细胞亚群变化 结果如图1所示，治疗前，2组患儿外周血淋巴细胞亚群比例和NK细胞比例比较无统计学意义。治疗后，观察组外周血CD4+T淋巴细胞、CD16+CD56+细胞比例以及CD4+/CD8+比值显著高于治疗前和对照组治疗后（P＜0.05）。而2组患儿CD8+T淋巴细胞比例均较治疗前显著下降，其中观察组下降更为显著（P＜0.05，见图1）。

图1 治疗前后2组患儿外周血淋巴细胞亚群比较Fig.1 Comparison of peripheral blood lymphocyte subsets in children of two groups before and after treatment

2.2 2组患儿治疗前后外周血血清TNF-α和IL-10水平变化 结果如图2所示，治疗前，2组患儿外周血血清TNF-α和IL-10水平差异比较不具统计学意义。治疗后，2组患儿外周血血清TNF-α和IL-10的水平较治疗前均显著下降（P＜0.05），且观察组显著低于对照组（P＜0.05）。

图2 治疗前后2组患儿血清TNF-α和IL-10水平比较Fig.2 Comparison of serum TNF-αand IL-10 levels in children of two groups before and after treatment

2.3 2组患儿治疗后结核菌转阴率比较 结果如表1所示，经过治疗后，痰涂片结果显示，对照组40例患儿涂片呈阴性，阴转率为90.9%，观察组45例患儿涂片呈阴性，转阴率为100%，2组患儿阴转率差异比较具有统计学意义（P＜0.05）。

表1 治疗后2组患儿结核菌阴转情况比较Tab.1 Comparison of tuberculosis overcast in two groups after treatment

3 讨论

结核病是严重危害人类健康的慢性传染病，是我国重点控制的重大疾病之一，我国儿童结核病相当严峻，感染率及患病率仍高，机体免疫状态是决定结核病发生、发展的一个重要影响因素。结核免疫以T淋巴细胞介导的细胞免疫为主，同时体液免疫的也发挥一定的作用［9-10］。国内外研究显示：肺结核患者体内细胞免疫功能异常，CD4+T淋巴细胞减少，CD8+T淋巴细胞增多，CD4+/CD8+比例下降甚至倒置［11］。Jeong YH等［12］研究结果显示，肺结核患者在经过抗结核治疗后，体内CD4+T淋巴细胞都有不同程度的提高，CD4+/CD8+比例也随之升高，本研究中，2组患儿在经过2个疗程的治疗后，CD4+T淋巴细胞比例、CD16+CD56+细胞比例和CD4+/CD8+比值都表现出不同程度的上升，另外，CD8+比例也较治疗前有显著下降。结果提示，经过系统的抗结核治疗后，患儿体内细胞免疫功能得到显著改善。

国内外研究证明，细胞因子参与结核病的应答及免疫反应过程。Mattos AM等［13］研究表明，结核病患者由于结核菌的感染，会激活体内T细胞释放肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-10（IL-10）等细胞因子。TNF-α由单核巨噬细胞和淋巴细胞所产生，能够促进巨噬细胞活化，增强其吞噬作用；参与肉芽肿形成，从而在结核分枝杆菌感染中起保护作用，而过量的TNF-α则可致病情恶化，对机体产生损伤反应［14-15］。IL-10作为抑制性细胞因子，其分泌过多则可能促进结核分枝杆菌感染慢性化和复发［16-17］。在本研究中，2组患儿经过2个疗程的治疗后，外周血血清TNF-α和IL-10水平均显著下降，说明本研究中2组治疗方案对肺结核患儿免疫功能的影响与调节机体内细胞因子有关。

母牛分枝杆菌菌苗是一类双向免疫调节制剂，可作为联合用药，用于结核病化疗的辅助治疗［18-19］。Stanford等［20］学者进行了长期的系列研究，均证明母牛分枝杆菌菌苗能够增强动物细胞免疫功能和抗结核菌感染功能，是迄今为止最好的结核病免疫调节剂，诸多文献报道了母牛分枝杆菌菌苗在结核病方面的治疗［21］。本研究中，采用母牛分枝杆菌菌苗联合化疗对肺结核患儿进行治疗，与单纯化疗相比，联合治疗组患儿在免疫功能改善和细胞因子水平调节方面表现出更加显著的疗效，结核菌转阴率也显著高于对照组。

综上所述，肺结核患者接受母牛分枝杆菌菌苗联合化疗方案治疗后，其细胞免疫功能改善以及疗效更加显著。

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（编校：谭玲）

Effect of M ycobacterium vaccae vaccine combined w ith chemotherapy on immune function in treatment of children w ith pulmonary tuberculosis

ZHAN Chun-xiao1，WU Sun2，ZHANG Chong3，GUO Qing-he4

（1.Third Department of Tuberculosis Internal Medicine，First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College，Xinxiang 453100，China；2.Department of Blood Internal Medicine，First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College，Xinxiang 453100，China；3.College of Medicine，Xinxiang Medical University，Xinxiang 453100，China；4.Medical Inspection Institute，Xinxiang Medical University，Xinxiang 453100，China）

ObjectiveTo investigate the effect of Mycobacterium vaccae vaccine combined with chemotherapy on immune function in treatment of children with pulmonary tuberculosis.Methods89 caseswith pulmonary tuberculosis from December 2010 to December 2013 treated in three hospitals in xinxiang city were randomly divided into controlgroup and observation group.The controlgroup was given regular chemotherapy，the observation group was given chemotherapy combined with Mycobacterium vaccae vaccine therapy.CD4+，CD8+，CD8+/CD4+and CD16+CD56+in peripheral blood were evaluated by FCM before and after treatment.Serum TNF-αand IL-10 levels were detected by the method of ELISA.Taking 3 sputum samples（night sputum，morning sputum and sputum atmoment）of each patient to smear after treatment.ResultsBefore treatment，there was no significant difference of each index between two groups.After treatment，CD4+，CD4+/CD8+and CD16+CD56+in the observation group were significantly higher than that before treatment and the control group（P＜0.05）.The proportion of CD8+in two groups was significantly lower than before treatment（P＜0.05），the difference between groups was not statistically significant.Serum TNF-αand IL-10 levels decreased significantly in two groups than those before treatment and the control group（P＜0.05）.After treatment，the negative conversion rate in the control group was90.9%（n=40），while 100%（n=45）in the observation group.The difference between two groupswas statistically significant（P＜0.05）.ConclusionMycobacterium vaccae vaccine combined with chemotherapy has a significant effect on children with pulmonary tuberculosis.It could significantly improve the immune function of children.

Mycobacterium vaccae vaccine；chemotherapy；pulmonary tuberculosis；immune function

R521

A

1005-1678(2014）07-0129-03

河南省教育厅科学技术研究重点项目13A320863

张春晓，女，本科，主治医师，研究方向：结核病学，E-mail：okzcxiao@126.com。