邵 月

(河南财经政法大学体育部，河南 郑州 450002)

现代医学研究认为，糖尿病(DM)是由于糖脂代谢紊乱诱发的“糖脂病”〔1〕。运动不但能够提高胰岛素敏感性，还可以通过独立于胰岛素之外的途径促进骨骼肌葡萄糖转运和利用，对2型糖尿病(T2DM)的预防和治疗具有一定的现实意义，如何有效促进骨骼肌摄取和利用血糖也成为治疗T2DM的一个新的研究方向。长期有规律运动对机体功能会产生良好的刺激和塑造作用。本研究选取代谢相关基因GLUT4、AMPKα2、PDK4和CPT-1β作为研究对象，在骨骼肌代谢酶基因转录水平上揭示病理条件下骨骼肌对长期耐力训练产生运动适应的分子机制。

1 材料与方法

1.1实验动物 2型糖尿病(T2DM)大鼠12只，约8周龄，体重(250±5)g，上海斯莱克实验动物公司提供。自由饮食，环境温度20℃～23℃，相对湿度50%～70%，自然光照。

1.2主要试剂与仪器 总RNA提取试剂Trizol购自Invitrogen；cDNA第一链合成试剂购自Promega；SYBR green PCR Master Mix购自TO YOBO(上海东洋纺)。Real-time PCR仪：Applied Biosystem StepOne型；离心机：Eppendorf 5804/R型。

1.3动物分组及运动方案 大鼠适应性喂养1 w后随机分为安静组(GKC)、耐力训练组(GKE)。跑台训练6 w，速度≤16.7 m/min，训练时段18∶30～22∶00，周日停训1次。

1.4取材 末次训练后24～48 h内大鼠断颈处死，20 min内分别取完整的左右下肢腓肠肌，切分若干份后置于液氮中速冻，-80℃超低温冰箱保存，待检测。

1.5荧光定量PCR检测GLUT4、AMPKα2、PDK4和CPT-1β的基因转录

1.5.1骨骼肌RNA的提取和鉴定 取腓肠肌样品约100 mg进行RNA抽提，选取质量和纯度符合RT-PCR要求的RNA进行逆转录反应。

1.5.2逆转录反应 取9.5 μl总RNA以oligo dT为引物进行反转录和cDNA合成。反应条件:37℃，50 min；70℃，10 min；冰上放置5 min，分成若干份-20℃储存，备用。

1.5.3扩增引物 见表1。

1.5.4荧光定量PCR cDNA样品按以下反应体系进行:2×SYBR green PCR MasterMix 10 μl，上游引物1 μl，下游引物1 μl，ddH 204 μl，模板cDNA 4 μl，总体积20 μl。……