1.广东药学院中药学院，广东 广州 510006；2.广东药学院基础学院，广东 广州 510006；3.广州白云华南生物科技有限公司，广东 广州 510545

红葱提取物对酪氨酸酶的抑制作用

何云1王庆华2*王晓艺1王红星3

1.广东药学院中药学院，广东 广州 510006；2.广东药学院基础学院，广东 广州 510006；3.广州白云华南生物科技有限公司，广东 广州 510545

研究红葱不同溶剂提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用。方法：通过95%乙醇、60%乙醇和水等三种不同的提取方式获得红葱提取物，采用L-多巴速率氧化法，研究提取物对蘑菇酪氨酸酶催化L-多巴氧化活性的影响。结果：95%乙醇、60%乙醇和水的提取物对酪氨酸酶酶抑制作用的IC50分别约为5.76、3.04和5.81 mg/ml。结论：上述三种提取物均对蘑菇酪氨酸酶有一定的抑制作用，红葱60%醇提物对酪氨酸酶抑制作用最强。

红葱；酪氨酸酶；抑制作用

酪氨酸酶(Tyrosinase, EC1.14.18.1) 是一种多酚氧化酶[1, 2]，广泛存在于动植物和人体内，是动植物体酶促褐变、体内色素合成的关键酶[1, 3]。它能将酪氨酸羟化，产生邻位二羟基苯丙氨酸(L-多巴)，然后再将多巴氧化成多巴醌，进而产生黑色素。因此，其代谢产物黑色素决定皮肤颜色深浅，其异常过量表达可导致人体的色素沉着性疾病，如雀斑、黄褐斑、老年斑等，因此酪氨酸酶活性是化妆品行业皮肤美白和治疗皮肤色素沉着性疾病的药物作用研究靶点。近年来，酪氨酸酶抑制剂的研究非常活跃，有关植物提取物对酪氨酸酶的抑制作用也越来越受到研究人员的重视。

红葱为鸢尾科红葱属红葱Eleutherine americana Merr. et K. Heyne ，以全草、鳞茎入药。原产于西印度群岛，我国广西、云南等地有分布，为民间药用植物[4]。《中华本草》[5]记载，红葱有清热凉血、活血通经、消肿解毒的作用，主治吐血、咯血、体虚乏力，头晕心悸，关节痛，跌打肿痛等。但目前对该药物的药理作用研究较少，本文报道了不同红葱提取方式对酪氨酸酶的影响，较好的阐明了红葱对酪氨酸酶的抑制作用和机制，可为进一步开发和临床用药提供理论基础。

1 实验部分

1.1 仪器与材料 752紫外可见分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司；FA2104型电子天平，上海舜宇恒平科学仪器有限公司；HH-1型电子恒温水浴锅，金坛市杰瑞尔电器有限公司。红葱，广州白云华南生物科技有限公司云南种植基地提供；蘑菇酪氨酸酶(845U/mg)，worthington公司；L-多巴，广州菲博生物科技有限公司；其他试剂均为国产分析纯。

1.2 红葱提取物的制备 鲜红葱，烘干，粉碎后取1000 g，加入8倍量的95%(V/V)的乙醇和60%以及水分别提取2次，每次1 h。提取液过滤，合并滤液，滤液回收乙醇，得浸膏。在60℃下将浸膏浓缩到相对密度为1.30～1.40的稠膏，在60～70℃，-0.08 mpa的条件下真空干燥，粉碎，即得红葱提取物。

1.3 对酪氨酸酶活力的抑制作用 在pH6.8，25 mmol/L 磷酸盐缓冲液体系中，以L-多巴为底物，将0.2 ml不同质量浓度的红葱提取物与0.2 ml酪氨酸酶溶液于30℃预混合10 min后，加入 1 ml30℃L-多巴开始反应，立即放入分光光度计中在475 nm处测定吸光值，共测定3次，根据以下公式计算红葱提取物对酪氨酸酶二酚酶活性的抑制率:

式中A1为含L-多巴、酪氨酸酶的测活体系时4 min时的吸光值；A2为含酪氨酸酶的测活体系4 min时的吸光值；A3为含L-多巴、酪氨酸酶、红葱提取物的测活体系4 min时的吸光值；A4为酪氨酸酶、红葱提取物的测活体系4 min时的吸光值；式中：A1、A2、A3、A4分别为表1中1、2、3、4号反应液的吸光度值。

表1 反应液组成

2 结果与讨论

以L-多巴为底物，固定酪氨酸酶和L-多巴的质量浓度分别为2.75×10-3mg/ml和2 mg/ml，以熟知的酪氨酸酶抑制剂曲酸和维生素C为阳性对照，考察95%、60%乙醇提取物和水提取物对酪氨酸酶二酚酶活性的影响。由图1可见，三种红葱提取物对酪氨酸酶二酚酶均具有抑制作用，且抑制率随着红葱提取物浓度的增加而增大。95%乙醇提取物、60%乙醇提取物和水提取物的IC50分别约为5.76 mg/ml、3.04 mg/ml和5.81 mg/ml。以60%乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用最为显著，其质量浓度为6.4 mg/ml时，对酪氨酸酶二酚酶活性的抑制率可达79.1%。在本酶活性测定体系中，阳性对照样品曲酸和维生素C的IC50值分别约为3.84×10-3mg/ml和20.2×10-3mg/ml(图2、3)。

目前多巴色素氧化法广泛用于美白成分的筛选。曲酸和维生素C是熟知的酪氨酸酶抑制剂，实验中以此作为阳性对照，结果显示本测试体系的结果与文献一致[6]。实验中红葱60%乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制效果最好，优于95%醇提和水提物，说明红葱中酪氨酸酶抑制剂成分在60%乙醇的溶解度较大。研究发现红葱含萘酚类、萘醌类和蒽醌类化学成分[2,7]，此类物质通常具有酪氨酸酶活性抑制作用[8]。红葱60%乙醇提取物的IC50约为3.04 mg/ml，相较于文献报道的一些具有美白作用的药用植物提取物要低得多，如白芨水提取物(IC50 28 mg/ml)[9]，地榆多酚70%丙酮提取物(IC50 14.5 mg/ml)[10]、银杏叶50%乙醇提取物(IC50 6.59 mg/ml)[11]、毛环竹95%乙醇提取物(IC50 7.88 mg/ml)、翠竹95%乙醇提取物IC50 6.83 mg/ml)[12]，显示了红葱良好的美白功效潜力。

3 结论

实验结果表明，红葱提取物可有效抑制酪氨酸酶二酚酶活性，60%乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制效果优于95%醇提取物和水提取物，IC50值约为3.04 mg/ml。实验为今后红葱这一民间药材在食品和化妆品等领域进一步开发利用提供一定参考。

[1]陈清西，林建峰，宋康康.酪氨酸酶抑制剂的研究进展[J].厦门大学学报(自然科学版)，2007，46(2)：274-282.

[2]Chakraborty A K, Funasaka Y, Komoto M, et al.Effect of arbutin on melanogenic proteins in human melanocytes[J].Pigment Cell Res，1998，11(4)：206-212.

[3]Kim Y J, Uyama H.Tyrosinase inhibitors from natural and synthetic sources： structure, inhibition mechanism and perspective for the future[J].Cell Mol Life Sci，2005，62(15)：1707-1723.

[4]刘西京，汪程远，王乃利，等.红葱萃取物对离体大鼠主动脉血管环的影响研究[J].中国药房，2009，20(18)：1376-1378.

[5]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海： 上海科学技术出版社，1999：7310-7311.

[6]黄璜，宋康康，陈清西.曲酸作为化妆品添加剂的增白作用机理研究[J].厦门大学学报(自然科学版)，2003，42(5)：652-656.

[7]刘西京，阎玺庆，王乃利.红葱化学成分研究[J].中药材，2009，32(1)：55-58.

[8]Kusuma I W, Arung E T, Rosamah E, et al.Antidermatophyte and antimelanogenesis compound from Eleutherine americana grown in Indonesia[J].J Nat Med，2010，64(2)：223-226.

[9]黄浩，彭玲，刘临，等.中药白芨提取物对酪氨酸酶的抑制作用[J].日用化学工业，2008，38(6)：374-377.

[10]刘海英.地榆多酚的组分分析及功能研究[D].西安： 陕西师范大学，2009.

[11]韩鹏，邱凌，黄浩，等.银杏叶和银杏外种皮乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制作用比较[J].厦门大学学报(自然科学版)，2005，44(S1)：116-119.

[12]张永兵.竹叶提取物对酪氨酸酶和黑色素瘤细胞的影响[D].北京： 中国林业科学研究院，2009.

InhibitionofEleutherineplicataextractontyrosinase

HE Yun1,WANG Qing-hua2*,WANG Xiao-yi1,WANG Hong-xing3

1.Pharmaceutical College of Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China;2.The School of Basic Courses of Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006,China;3.Guangzhou Baiyun South China Bio-Technology Co., Ltd, Guangzhou 510545,China

To study the inhibition of Eleutherine plicata extract on the activity of tyrosinase. Methods: Three extracts of Eleutherine plicata were used to investigate the inhibition on the activity of tyrosinase by measuring the oxidation rate of L-dopa. Results: The IC50 of its 60% ethanol extract, 95% ethanol extract and water extract were about 5.60, 3.04 and 5.85mg/ml, respectively. Conclusion: These three extracts were on a certain inhibition of tyrosinase, and the 60% ethanol extract had the highest inhibitory activity to tyrosinase.

Eleutherine plicata；tyrosinase；inhibition

何云(1990-)，女，汉族，在读硕士，研究方向：中药制药工程与技术;E-mail：heyun1059947332@163.com

王庆华。

R285

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1007-8517(2014)10-0013-02

2014.02.24)