郭丽

FQ-PCR法与染色涂片法检测脑脊液结核杆菌的对照性分析

郭丽

目的 对比荧光定量聚合酶链式反应法(FQ-PCR)及染色涂片法在脑脊液结核杆菌检测中的应用价值。方法 结核性脑膜炎(TBM)疑似患者320例, 临床医师在无菌操作下抽取患者脑脊液送至实验室进行FQ-PCR法与染色涂片法检测, 观察检测结果。结果 320例TBM疑似患者共确诊45例。FQ-PCR法检测的阳性率为15.63%, 明显高于染色涂片法的6.25%, 差异具有统计学意义(P＜0.05)；染色涂片法检测的特异度为92.31%、灵敏度为44.44%, 均低于FQ-PCR方法的98.21%、90.91%, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论 相较于染色涂片法, FQ-PCR法具有更高的特异度及灵敏度, 且操作快速、简便, 在脑脊液结核杆菌的检测中具有重要的应用价值。

荧光定量聚合酶链式反应法；染色涂片法；结核性脑膜炎；脑脊液结核杆菌

结核性脑膜炎(TBM)是由结核杆菌导致的脊膜与脑膜的非化脓性炎性疾病。近年来, 随着吸毒、AIDS、酗酒、免疫抑制剂使用率的不断提高, 致使TBM的发生率迅速递增。TBM是结核病中死亡率最高的类型之一［1］, 早发现、早治疗对TBM患者的疗效及预后十分重要。临床发现, TBM的临床表现及脑脊液(CSF)测定均不具备典型特征, 这给确诊带来了极大的困难。本研究对320例疑似TBM的患者分别应用FQ-PCR及染色涂片法进行CSF抗酸杆菌测定, 对比两种方法的检测结果, 为提高临床诊断效果提供有效参考。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年1月～2014年1月本院收治的TBM疑似患者320例, 临床医师在无菌操作下抽取患者脑脊液送至实验室进行FQ-PCR法与染色涂片法检测。

1.2 仪器 FQ-PCR实时定量检查仪(型号：ABI 7300, 产地：美国)；试剂：结核分枝杆菌(TB)核酸扩增荧光检测试剂盒［2］(深圳市匹基生物工程有限公司, 国药准字S20030084)。

1.3 方法

1.3.1 FQ-PCR法 CSF标本以1500 r的速度离心5 min,去除上清液, 将TB核酸提取液50 µl加入沉淀物中, 轻弹管底使沉淀物悬浮。在100℃放置样本, 然后在-20℃或4℃下冷却。样本管以10000 r的速度离心5 min, 选择上清液, 反应模板以4℃内保存, 在自动反应管中加入模板上清液2 µl以供PCR使用, 具体操作根据试剂盒说明书的要求严格执行。

1.3.2 染色涂片法 脑脊液标本离心后, 沉渣方式涂片抗酸染色, 并在镜下查找抗酸杆菌。

1.4 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计学分析。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法的抗酸杆菌测定结果 320份CSF标本经染色涂片法检测, 共检出抗酸杆菌20例, 阳性率为6.25%；经FQ-PCR法检测, 检出抗酸杆菌50例, 阳性率为15.63%；FQ-PCR检测法的阳性检出率明显高于染色涂片法, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 两种方法测定CSF结核杆菌的性能评估 320例疑似TBM的患者经MRI、CT、CSF生化检验并结合临床症状诊断后, 共有45例确诊为TBM。FQ-PCR检测CSF结核杆菌的阳性率、特异度、灵敏度均高于染色法, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 两种方法测定CSF结核杆菌的性能评估(%)

3 讨论

目前, TBM的诊断依据主要依赖于临床表现、CSF检查结果及相关影像学检查, 其中CSF的免疫学、生化及病原学、细胞学测定结果是确诊的重要参考值。同时, 作者了解到,早诊断、早治疗对TBM患者的疗效及预后具有重要的影响,因此选择一种快速、有效的结核杆菌检测方法是保障TBM患者健康的关键。

本文研究结果可见, FQ-PCR对于CSF结核杆菌的阳性检出率明显高于染色涂片法(P＜0.05)；染色涂片法特异度为92.31%、灵敏度为44.44%, 均低于FQ-PCR方法的98.21%、 90.91%(P＜0.05)。其中FQ-PCR的阳性检出率为50例, 高于确诊TBM的45例, 作者认为这可能与FQ-PCR方法敏感性过高、实验或取样送检过程中感染所致的假阳性有关；还可能与医师在未经影像学及临床症状确诊的情况下用药, 而使患者病情在未确诊的情况下痊愈有关。虽然上述两种原因可造成FQ-PCR阳性诊断率高于确诊率, 但二者阳性率之间的差异性较小。

染色涂片法对于TBM的检出率较低, 且需要进行1个月的培养处理, 耗时过长, 延误了患者的治疗时间。目前,改良染色涂片法虽然提高了检出率, 但检测效果也是差强人意［3］。因此, 在现阶段的结核杆菌检测方法中, FQ-PCR具有更明显的应用优势, 有效提高了临床确诊率。

综上所述, FQ-PCR作为特异度强、灵敏度高、快速、简便的脑脊液结核杆菌检查方法, 在TBM的诊断中具有重要的临床应用价值, 值得推广。

［1］ 张爱民.实时荧光定量聚合酶链反应检测脑脊液中结核杆菌DNA的临床应用.中国临床实用医学, 2010, 4(1):652.

［2］ 巩建华,薛秀荣,马爱玲.脑脊液结核杆菌抗原及核酸联合检测对结核性脑膜炎早期诊断的评价.河北医学, 2012, 18(9):122-124.

［3］ 魏建华,薛晓红,熊建军, 等.结核分枝杆菌DNA分子生物学检测.预防医学情报杂志, 2012, 28(1):56-58.

2014-06-30］

130500 吉林省结核病医院检验科