向东山等

摘要利用无标记的分子信标及核酸染料Hoechst 33258建立了一种高灵敏、高选择性的特定序列核酸检测方法，并以野生型乙型肝炎病毒的一段寡核苷酸序列为目标DNA，对这种方法进行了验证。

1引言

特定序列单链核酸（DNA）的特异性检测在临床诊断、基因治疗、环境调查、食品安全及生物医学研究等领域都具有十分重要的意义＼[1～5＼]。分子信标（Molecular beacons）是一种呈发夹结构的茎环双标记的寡核苷酸探针，具有操作简单、选择性好以及不必与未反应的探针分离即可实时检测等特点，在特定序列单链DNA的检测中扮演着越来越重要的角色＼[6～13＼]。近年来，有关分子信标对特定序列单链DNA检测的报道逐渐增多＼[14～16＼]。尽管分子信标在DNA的定性及定量分析中显示出广阔的应用前景，但经典分子信标在实际定量分析中还存在一些不足： （1） 经典分子信标具有较强的背景信号，影响定量检测的检出限＼[17＼]；（2） 相对于核酸染料而言，分子信标对核酸检测的灵敏度较低；（3） 经典分子信标需要在两端分别标记荧光基团及猝灭基团，制备时间长且成本高。

核酸染料Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，具有很高的灵敏度＼[18，19＼]。它在水溶液中荧光很弱，与单链DNA几乎不发生作用，但与双链DNA具有很强的亲和性，能嵌入双链DNA的小沟中，与双链中的A/T碱基对发生特异性结合，使其结构发生变化，导致荧光强度大大增加＼[20，21＼]。根据此原理，Hoechst 33258在双链 DNA 含量测定中，已得到广泛应用＼[22，23＼]。

Hoechst 33258 与分子信标联合应用的报道较少。……