阿维菌素高产菌株的诱变筛选及生产工艺的优化
2014-09-01杨洋
杨洋
摘要:阿维菌素是具有杀虫、杀螨、杀线虫的酯类化合物,广泛应用于现代农作物,本文通过运用紫外线、亚硝基胍诱变的方式对阿维菌素的出发菌株SDSLAV-1进行了诱变,筛选除了阿维菌素的高产菌株SDSLAV-02-01,其比出发菌株要高47%。
关键词:阿维菌素 诱变筛选 工艺
阿维菌素具有安全、高效的农药特性,在常规用量下对人畜不会构成伤害,因此阿维菌素具有广泛的应用空间,由于阿维菌素生产企业之间的竞争加速,要求阿维菌素生产企业要降低生产成本,提高阿维菌素发酵单位与成品收率、优化生产工艺。
1 阿维菌素诱变筛选的材料与方法
1.1 材料
1.1.1 出发菌株。阿维链霉菌由山东胜利生物工程有限公司提供,出发菌株经过诱变之后得到SDSLAV-01、SDSLAV-02。
1.1.2 主要试剂。本实验采取的化学原料主要包括:玉米淀粉、高温黄豆饼粉、花生饼粉、亚硝基胍、淀粉酶等。
1.1.3 主要仪器。实验中涉及到的仪器包括:PH机、超净工作台、摇床、显微镜、发酵罐、种子罐、结晶罐等。
1.1.4 培养基。培养基主要包括:一级种子罐培养基、二级种子罐培养基、发酵罐培养基,不同的培养基具有不同的配方。
1.2 诱变方法
1.2.1 紫外线诱变。首先取5ml配制好的阿维菌悬液放入直径90mm的无菌培养罐中,并利用无菌的磁力棒进行搅拌,然后放在功率为20W的紫外线下,打开无菌培养罐,进行边照射边搅拌,然后按照不同的时间段,提出相同的阿维菌素液进行不同程度的稀释,最后放置在分离平板上,进行7~9d的培养。
1.2.2 亚硝基胍诱变。使用浓度为108个/ml的磷酸缓冲液制备孢子悬液,分别用不同浓度的NTG处理紫外线诱变后的突变株单孢子悬液,在适当的温度环境下震动30秒后,利用生理盐清洗3遍后,至于分离平板,倒置培养7d。……
