赵翠娇，宁保安，范献军，李桂敏，高志贤1，#

1)郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室 郑州 450001 2)军事医学科学院卫生学环境医学研究所 天津300050

T7噬菌体尾蛋白P11的表达、纯化及鉴定

赵翠娇1)，宁保安2)，范献军2)，李桂敏2)，高志贤1，2)#

1)郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室 郑州 450001 2)军事医学科学院卫生学环境医学研究所 天津300050

#通讯作者，男，1966年5月生，博士，研究员，研究方向：食品安全，E-mail：gaozhx@163.com

T7噬菌体；P11蛋白；多克隆抗体

目的：表达、纯化T7噬菌体尾蛋白P11并进行鉴定。方法PCR扩增T7噬菌体尾蛋白P11基因片段，EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后连接表达载体pTIG-TRX，重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导表达，纯化目的蛋白，SDS-PAGE分析P11蛋白的相对分子质量大小，并多次免疫新西兰大白兔制备其多克隆抗体，Western blot鉴定蛋白活性。结果PCR扩增P11基因后，成功诱导表达了含6×His标签的P11蛋白，SDS-PAGE显示所表达蛋白的相对分子质量约为25 000，通过多次免疫获得了抗P11的多克隆抗体并对其纯化；制备的多克隆抗体能够识别T7噬菌体和P11蛋白，具有较高特异性。结论成功表达了P11蛋白并制备了其多克隆抗体，为T7噬菌体展示系统的应用奠定了基础。

T7噬菌体展示系统具有操作简便、复制周期短、容易培养、生长迅速、系统稳定、不需要分泌到周质或膜外而直接展示的优点，因此，T7噬菌体展示已发展为一种常见的展示系统，被广泛应用于筛选基因工程抗体[1-3]。T7噬菌体衣壳蛋白主要包括头蛋白P10A、P10B,颈圈蛋白P8，尾蛋白P11、P12和尾丝蛋白P17[4-5]。P11蛋白位于T7噬菌体的尾部。将制备的抗P11蛋白多克隆抗体应用于噬菌体ELISA筛查，可使得融合于P10的蛋白或多肽更加有效地展示。……