★ 胡凤鸣 丁志军 罗美兰 廖银根

(江西省皮肤病专科医院 江西 南昌 330001)

复方连芩凝胶系江西省皮肤病专科医院中医科专家多年临床总结经验方，由黄连、黄芩、苦参、黄柏、地肤子、紫草和蛇床子等7味中药组成，具有泻火解毒、除湿的功效，临床上主要用于治疗湿疹、皮炎等风热、湿热之皮肤病。为了将复方连芩煎剂更好地应用于临床，我院研究开发出携带和使用均方便的复方连芩凝胶剂，并对其制备工艺进行了研究。

1 仪器与试药

Agilent 1200 高效液相色谱(HPLC)系统(美国安捷伦科技有限公司)；CP225D微量天平(德国Sartorius 公司)；KQ-500E医用超声清洗器(昆山超声仪器有限公司)。

盐酸小檗碱、黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号分别为110713-201212、110715-201117)；黄连、黄芩、黄柏饮片(安徽致和堂药业有限公司，批号分别为120618，111209，120107)；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 评价指标的确定 复方连芩凝胶处方中有多味药材，有效成分众多，根据文献和药材实验结果，选取君药黄连、臣药黄柏的有效成分盐酸小檗碱及另一臣药黄芩中有效成分黄芩苷含量作为优选工艺的考察指标，符合配方及工艺的特点。

2.2 盐酸小檗碱和黄芩苷的含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A、0.05 mol/L磷酸二氢钾为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，检测波长为278 nm，流速为1.0 mL/min；柱温为20 ℃；进样量为5 μL。

时间/min流动相A/%流动相/B0-920809-403367

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱、黄芩苷对照品适量，加流动相溶解，制成每1 mL分别含50 μg、60 μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 精密量取提取浓缩液1 mL，置具塞锥形瓶中，精密加入75%乙醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率：250 W，频率：33 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用75%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例，称取本处方中除黄连、黄芩、黄柏外的各味药材，分别加10倍水，煎煮两次，每次1 h，减压浓缩，定容至1000 mL，按上述供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

2.2.5 测定法 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各5 μL，注入液相色谱仪测定其峰面积，计算盐酸小檗碱、黄芩苷含量。液相色谱图见图1。

A.对照品；B.供试品；C.阴性对照品

2.3 药材饮片中有效成分的含量测定

2.3.1 黄连药材饮片中盐酸小檗碱的含量测定[1]称取黄连饮片粉末(过二号筛)约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸(100∶1)的混合溶液50 mL，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按中国药典2010年版一部黄连含量测定项下方法进样，测得黄连饮片中盐酸小檗碱含量为6.12%。

2.3.2 黄柏药材饮片中盐酸小檗碱的含量测定[1]取本品粉末(过三号筛)约0.1 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加流动相80 mL，超声处理40min，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按中国药典2010年版一部黄柏含量测定项下方法进样，测得黄柏饮片中盐酸小檗碱含量为4.36%。

2.3.3 黄芩药材饮片中黄芩苷的含量测定[1]取本品中粉约0.3 g，精密称定，加70%乙醇40 mL，加热回流3h，放冷，滤过，滤液置100 mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。按中国药典2010年版一部黄芩含量测定项下方法进样，测得黄芩饮片中黄芩苷含量为9.86%。

2.4 正交试验优选提取工艺

2.4.1 试验设计 通过预试验对影响水煎煮的各因素进行考察，选择加水量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)为影响水煎煮的主要因素，每个因素选取3个水平。因素水平见表1。

表1 因素水平表

2.4.2 正交试验安排及结果 按处方比例称取黄连、黄芩、黄柏等药材72 g，共9份，根据L9(34)正交试验设计表，将药材浸泡0.5 h后提取。提取完毕后，将不同条件下的水提液分别浓缩至适量，定容至1000 mL，称定重量，备用。以盐酸小檗碱、黄芩苷转移率为评价指标进行试验。正交试验结果见表2；方差分析结果见表3。

表2 正交试验结果

表3 方差分析结果

由表2、表3可知，以盐酸小檗碱为评价指标，A因素有显著性影响，各因素的影响顺序为A>C>B，以A3B1C2最佳；以黄芩苷转移率为评价指标时，A因素有显著性影响，各因素影响顺序为A>C>B，以A2B1C3最佳。考虑到节约能源，降低成本，从而得到最佳工艺为A2B1C2，即加10倍量水，提取2次，每次1 h。

2.5 工艺验证试验 为了验证正交试验结果的准确性，以确保提取工艺合理可行，按上述工艺条件A2B1C2，重复安排3批试验。结果，盐酸小檗碱、黄芩苷平均转移率分别为69.5%、71.2%，与正交试验较好的结果相近，表明优选的工艺合理、可行。

3 讨论

在测定指标成分含量时，以HPLC同时测定复方连芩凝胶提取液中盐酸小檗碱、黄芩苷含量，对其方法学进行了考察，分离效果理想，重现性好，考虑到本文主要报道提取工艺研究，故暂未将其列入正文。

采用正交设计，并根据预试验，确定了水提工艺的最佳条件，即称取水提取部分药材，加入药材量10倍体积的水，加热提取2次，每次1 h，其中第1次提取前先将药材浸泡0.5 h。

由于黄芩药材中含有多种酶，主要是黄芩酶，在一定的温度、湿度条件下，能使苷水解，黄芩酶遇冷水后活性增大，因此，黄芩应在水沸后加入。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:282、285、286.