车杭盈

南平市第二医院肿瘤内科，福建南平 354200

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，目前手术治疗仍是最有效的治疗手段，但大多数患者就诊时已处晚期，失去手术治疗机会，严重威胁人类健康。白花蛇舌草(Hedyotis diffusa，HD)系茜草科草本植物白花蛇舌草的全草，其味甘、淡，性凉，入心、肝、脾三经，具消肿、镇痛及解毒的功效。近来研究[1]表明，白花蛇舌草具有显著抗肿瘤活性，对肝癌、 结肠癌、白血病、 脑部肿瘤和前列腺癌等多种恶性肿瘤细胞均有明显的抑制作用，但与肺癌相关的研究鲜见报道。本研究选用非小细胞肺癌A549细胞株作为研究对象，以不同药物浓度白花蛇舌草注射液(Hedyotic diffusa willd injection，HDI)作用于A549细胞，观察其对细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其对肺癌细胞的潜在抗肿瘤机制，为将来临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 药物

HDI购自吉林省通化振国药业有限公司。临用前用RPMI-1640培养液稀释到终浓度。

1.2 试剂与仪器

CCK-8试剂盒购自日本Dojindo公司。Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒购自奥地利Bender Medsystems公司。Bcl-2、survivin、β-actin抗体购自美国Cell Signaling公司。RPMI-1640培养液、 胎牛血清均源于美国 Gibco BRL公司。荧光倒置显微镜为日本Olympus公司产品。电泳槽、半干转膜仪为美国 Bio-Rad公司产品。

1.3 细胞培养

非小细胞肺癌A549细胞株购自ATCC。置于 37 ℃、5%CO2饱和湿度条件的培养箱内进行培养，培养液为含10% FBS的双抗(100 IU青霉素和100 μg/ml链霉素)RPMI-1640培养液。每天更换培养液1次。

1.4 CCK-8法检测细胞增殖

细胞按1×105/ml接种于 96孔培养板。设3个HDI组及1个对照组，每组细胞分别加入不同浓度HDI(20、40、80 ml/L)后继续培养72 h。每孔加入10 μl WST-8，37 ℃孵育3 h。在酶联免疫检测仪OD为450 nm处测量各孔的吸光度值。……