李英伟

·临床医学·

Survivin、PTEN、PCNA在早期宫颈癌中的表达及意义

李英伟

目的 检测Survivin、PTEN和PCNA在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变、早期宫颈癌组织中的表达, 进一步探讨这些因子表达和细胞增殖及凋亡的关系。方法 应用免疫组织化学方法,检测正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变和早期宫颈癌组织中Survivin、PTEN和PCNA的表达情况。结果 Survivin在早期宫颈癌中的阳性表达率明显高于宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织(P＜0.05)；PTEN在早期宫颈癌组织中的高表达率明显低于宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织(P＜0.05)；PCNA在早期宫颈癌中的阳性表达率明显高于宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织(P＜0.05)；Survivin和PTEN在早期宫颈癌中的表达呈负相关(P＜0.05)。结论 Survivin、PTEN和PCNA可能在宫颈癌细胞的凋亡和增殖中发挥协同作用。Survivin和PTEN异常表达作为一种潜在的预测宫颈上皮内瘤皮(CIN)转归的指标有重要意义。

宫颈癌；Survivin；PTEN；PCNA；免疫组化

宫颈癌是全球妇女中第二个最常见的恶性肿瘤, 仅次于乳腺癌。近年来随着生殖道病毒性疾病和性传播疾病的增加,宫颈癌患病年龄呈现年轻化趋势［1］。目前人们发现了许多与宫颈癌发生相关的危险因素, 包括行为危险因素、生物学因素、遗传等方面因素。而细胞增殖和凋亡失衡成为肿瘤发生发展的重要机制。本实验采用免疫组织化学(S-P)方法, 通过对Survivin、PTEN、PCNA的进一步研究, 旨在探讨细胞增殖、凋亡与宫颈癌发生、发展的关系。希望能为宫颈癌开辟有效地临床治疗新途径提供可靠的理论依据。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 收集内蒙古赤峰学院附属医院病理科及内蒙古医学院第三附属医院2007～2009年存档的活检或手术切除的宫颈标本, 所有患者术前均未接受过激素治疗或放疗、化疗, 术后均经病理检查确诊。其中宫颈上皮内瘤变60例,包括CIN I 30例, CIN II～III 30例；早期宫颈癌30例。另选用正常宫颈组织(患子宫肌瘤行全子宫切除手术的)蜡块30例作为对照组。

1. 2 方法 采用免疫组化S-P法测定标本。

1. 3 免疫组化结果判断标准 光镜下观察免疫组织化学染色切片, Survivin以细胞浆表达为主, 偶见于细胞核；PTEN、PCNA以核表达为主。以细胞浆或细胞核出现淡黄色、棕黄色或棕褐色颗粒为阳性信号。无着色或与背景颜色一致为阴性细胞。

在北航图像中心Cmais真彩色病理图像分析系统下, 采用Frank等提出的半定量积分法确定其阳性强度。具体分析如下：①阳性细胞的百分率＜5%为0分, 6%～25%为1分, 26%～50%为2分, 51%～75%为3分, ＞75%为4分；②阳性细胞的强度：无着色或着色很弱, 0分；淡棕黄色为1分,棕黄色为2分, 深棕褐色为3分。两项积分相加:0分为阴性(-), 1～3分为弱阳性(+), 4～7分为强阳性(++～+++)。

1. 4 统计学方法 采用SPSS13.0软件对实验结果进行统计分析, 定性资料用阳性率(%)表示, Survivin、PTEN、PCNA的表达率比较用χ2检验；Survivin、PTEN、PCNA在三组中的表达水平比较采用秩和检验；Survivin、PTEN、PCNA 三者之间的关系用Spearman等级相关分析。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 Survivin在各组组织中的表达状况 Survivin在宫颈上皮内瘤变、宫颈癌组织中均有表达, 但是在正常宫颈组织中的表达为阴性。Survivin由正常宫颈-CIN-宫颈癌组织的阳性表达率逐渐增高:宫颈癌组高于CIN组, CIN组高于正常宫颈组织(P＜0.05)。Suvrvini阳性表达率随CIN级别的升高而升高：CIN II-III高于CIN I(P＜0.05)。而正常宫颈与CIN I之间及CIN II-III与宫颈癌之间差异均无统计学意义(P＞0.05)。

2. 2 PTEN在各组组织中的表达状况 本实验结果显示, PTEN蛋白在正常宫颈组织中强表达, 由正常宫颈-CIN-早期宫颈癌组织的阳性表达呈进行性下降, 在早期宫颈癌表达中多为阴性。

PTEN阳性表达率逐渐降低：显示正常宫颈和CIN I组之间无差异, 宫颈癌低于CIN, CIN低于正常宫颈, CIN高于CIN II～III, CIN I组、CIN II～III组与宫颈癌组间差异具有统计学意义(P＜0.05)

2. 3 PCNA在各组组织中的表达状况 本研究组宫颈上皮内瘤变及早期宫颈癌组织中有较丰富表达, 对照组正常宫颈组织中多为阴性表达。PCNA由正常宫颈-CIN-宫颈癌组织的阳性表达呈逐渐增高的趋势, 且随CIN级别的升高, PCNA指数亦升高。各级CIN和宫颈癌的PCNA指数都比正常宫颈有明显增加, 差异有统计学意义(P＜0.05), 其中从CIN I到CIN II～III, PCNA指数增高最为明显, 而宫颈癌与CIN II～III之间差异无统计学意义(P＞0.05)。

2. 4 宫颈癌组织中Survivin基因表达与PCNA、PTEN表达之间的关系 Survivin与PTEN、PCNA在早期宫颈癌中的表达经Spearman等级相关检验发现：在早期宫颈癌组中Survivin与PTEN的表达为负相关关系, 相关系数r=-0.824, P=0.00, 差异有统计学意义。PTEN与PCNA之间r=-0.740, P＜0.05, 表明两者之间呈负相关。Survivin与PCNA的表达作相关性分析, Survivin与PCNA之间为正相关关系(r=0.779, P＜0.01), 差异有统计学意义。由此得出, Survivin与PCNA存在正相关, 而与PTEN存在负相关, Survivin与PCNA表达率越高, PTEN表达率越低。

3 讨论

目前Survivin被认为在细胞周期调控、抗细胞凋亡、促血管生成、促进细胞转化及细胞增殖等方面均发挥重要作用。近年来研究表明肿瘤的发生、发展与Survivin密切相关。Ai Z等［2］发现Survivin在正常宫颈组织中表达均为阴性, 随宫颈病变程度加重, Survivin表达逐渐增强, 且与宫颈癌淋巴结转移情况呈正相关。在作者的研究中发现, 由正常宫颈-CIN-宫颈癌组织中Survivin的阳性表达率逐渐增高, 且随CIN级别的升高而升高, 相邻两组之间差异有统计学意义, 而CIN I和正常宫颈之间及CIN II-III与宫颈癌之间差异无统计学意义。说明在宫颈癌组织中Survivin基因蛋白呈高表达状态。可见Survivin在宫颈癌组织中的表达是一个渐进的过程。Survivin与肿瘤细胞生长失控以及肿瘤最终形成关系密切。

PTEN抑癌基因自发现以来就倍受肿瘤研究者的关注。Kurose K等［3］研究显示鳞状细胞癌者均有PTEN基因改变,且存在PTEN等位基因的缺失和突变。Depwski PL等［4］对63例宫颈上皮内瘤变, 85例宫颈鳞癌及12例正常宫颈采用免疫组化法检测, 发现随病变进展PTEN阳性表达率逐级降低, 认为在宫颈鳞癌的发生发展中PTEN基因有重要作用, 但并非独立的预后影响因素。马玉芳等［5］最近对60例宫颈鳞癌的PTEN表达水平进行免疫组化检测, 表明PTEN与宫颈鳞癌的分化程度有关。在本实验研究显示, PTEN突变与宫颈癌的发生有关。在宫颈癌组织中PTEN基因蛋白的表达强度明显低于CIN和正常宫颈组织, CINI组与宫颈癌组间差异具有统计学意义(P＜0.05), 说明在宫颈癌组织中其呈低表达状态,在宫颈上皮不典型增生演化过程中PTEN基因扮演了重要角色。PTEN蛋白表达可作为监测宫颈癌发生的辅助手段之一。

PCNA是近年来反应肿瘤生物学行为可靠的标志物。PCNA含量在正常增殖和转化的细胞中, 有明显的周期性变化, 是一种细胞周期调节蛋白。Morawski K等［6］在对喉癌术后患者的研究中发现, 原位复发组PCNA增殖指数显著高于未复发组。本研究结果显示PCNA的阳性表达率随着宫颈病变发展有递增趋势, 且在宫颈癌中的阳性表达明显高于CIN组, CIN组高于正常宫颈组。说明PCNA蛋白积累在宫颈癌发生、发展过程中起着重要和关键的作用。PCNA蛋白高表达可能促使宫颈鳞状上皮细胞过度增生并发生恶性转化。研究还发现宫颈癌组和CIN II～III组之间无显著性差异, 推测PCNA蛋白积累可能在宫颈癌发生增殖过程的早期起着重要作用, 其高表达与宫颈癌的发生及宫颈癌切除术后早期的复发、增殖密切相关。检测PCNA能够较为客观地反映细胞的增殖活性及生长速度, 是评估患者预后的良好指标。

Survivin在宫颈癌发生的早期或初始已过度表达, 可以作为评判宫颈癌发生或复发的早期诊断指标。在宫颈癌中Survivin与PTEN的表达存在负相关性, 可能在宫颈癌细胞的增殖和凋亡中发挥协同作用, 两者共同影响和参与了宫颈癌发生、增殖、恶变和复发。Survivin在宫颈癌组织中的高表达与PCNA的高表达具有一致性, 提示Survivin、PCNA在宫颈癌发生、浸润及转移过程中起着重要作用。Survivin、PTEN和PCNA异常表达作为一种潜在的预测CIN转归的指标起着重要意义。

［1］ 吴爱如. 妇科恶性肿瘤的流行病学.中国肿瘤, 1997, 6(2):3-5.

［2］ Ai Z, Yin L, Zhou X, et al. Inhibition of survivin reduces cell proliferation and induces apoptosis in human endometrial cancer. Cancer, 2006, 107(4):746-756.

［3］ Kurose K, Zhou XP, Araki T, et al. Biallelic inactivating mutations and an occult germline mutation of PTEN in primary cervical carcinoma. Genes Chromosomes Cancer, 2000, 29(2):166.

［4］ Depwski PL, Rosenthal SI, Roes JS. Loss of expression of the PTEN gene protein product is associated with poor outcome in breast cancer. Mod Pathol, 2001, 14(7):672-676.

［5］ 马玉芳, 刘铭球, 易建华, 等.肿瘤抑癌基因PTNE在宫颈鳞癌中的表达及其与分化程度的关系.郧阳医学院学报, 2003, 22(1):12.

［6］ Morawski K, Namyslowski G, Gabriel A, et al. Assessment of usefulness of PCNA and oncoprotein p53 staining in prediction of the recurrences in subjects operated on for laryngeal carcinoma. Otolaryngol Pol, 2000, 54(4):393-399.

2014-03-02］

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