王秀娟　孙尧

【摘要】 目的：观察乏氧条件下miRNA调节AMPK对胰腺β细胞发挥的作用。方法：经细胞培养及Real-time PCR，观察在乏氧条件下miR-29a通过AMPK调控胰岛β细胞功能的发挥。结果：INS-1细胞，主要表达AMPKα2，其磷酸化AMPK活性在乏氧条件下增加。用Real time PCR检测AMPK的表达，发现乏氧说明在胰腺β细胞，主要表达AMPKα2亚基。乏氧能促进HIF-1α表达，促进AMPK的活化。同时AMPK可能受miR-29a的调节。结论：乏氧条件下胰岛β细胞主要表达为AMPKa2，说明AMPK能促进胰岛β细胞细胞增殖。

【关键词】 AMPK； 胰腺β细胞； 乏氧； miR-29a

【Abstract】 Objective：To explore the mechanism by which miRNA plays roles in pancreatic β cells through regulating AMPK under hypoxic condition. Method：Under the condition of lack of oxygen miR - 29 a by AMPK regulation islet beta cell function were observed by cell culture and Real - time PCR.Result：The INS-1 cell primarily expressed AMPKα2， which the phosphorylation activity of AMPK was increased under hypoxic condition. the expression of AMPK was detected by Real time PCR， which suggested that pancreatic β cells primarily expressed AMPKα2 under hypoxic condition. Hypoxia could accelerate the expression of HIF-1α and the activation of AMPK. Meanwhile， AMPK might be regulated by miR-29a.Conclusion：Under the condition of lack of oxygen islet beta cells mainly expressed as AMPKa2， AMPK can promote cell proliferation islet beta cells.

【Key words】 AMPK； Pancreatic β cells； Hypoxia； miR-29a

First-authors address：Hebei United University，Tangshan 063000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.18.023

胰腺是一腺体器官，内分泌胰腺包括胰岛，约有100～1000激素分泌细胞散布在外分泌组织和通过血管团相互联系。胰岛的功能主要是通过产生多种激素维持代谢平衡，这些激素调节血糖水平。胰腺β细胞的功能受很多分子的调控包括信号转导通路、各种代谢分子及microRNA（miRNA）等构成一个复杂的网络系统，精确调控其行为[1-3]。miRNA是一种内源性的非编码RNA，广泛存在于真核生物中。而乏氧上调miR-29a通过AMPK抑制胰腺β细胞增殖、促进凋亡及促进自噬。笔者采用分子生物学和细胞生物学的方法研究特分析如下。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 RPMI 1640培养液 RPMI 1640培养基干粉为Invitrogen产品，去离子水配制，每升加入2.0 g的碳酸氢钠，充分溶解后用HCl调pH至7.4，0.22 μm滤膜过滤后4 ℃保存使用。

1.1.2 DMEM培养液 DMEM培养基干粉为Invitrogen 产品。去离子水配制，每升加入3.7 g的碳酸氢钠，充分溶解后用HCl调pH至7.4，0.22 μm滤膜过滤后4 ℃保存使用。

1.1.3 D-Hanks液配制 1 L含有0.12 g Na2HPO4·7H2O，0.06 g KH2PO4，0.35 g NaHCO3，0.4 g KCl，8 g NaCl。

1.1.4 0.25%胰蛋白酶 1L D-Hanks液（pH 7.4）含有2.5 g胰酶，充分溶解后过滤除菌于4 ℃保存。

1.1.5 其他材料 细胞培养用各式培养皿、培养板和其他耗材，均购自Corning公司。……