陈立忠，孙 艳，王海燕，姬艳波，孙海东

(中国人民解放军第208医院，长春 130062)

膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种常见的风湿性疾病，多见于中老年人，我国60岁以上人群发病率超过50%[1-2]。病因多为“肾虚血瘀”,故治以补肾活血为主[3]。现代药理研究表明，补肾活血中药不仅能降低一氧化氮水平，延缓骨关节炎的组织学改变[4]，同时有抗脂质过氧化、提高抗氧化酶活性、延缓关节软骨退变及促进关节软骨修复的作用[5]。经过多年的临床实践，我们研制了以滋阴养血为主的增液润节汤。为了进一步探讨其治疗作用及机制，建立兔膝骨关节炎(KOA)动物早期模型,观察其对血清超氧化物歧化酶(SOD)、关节液白介-1(IL-1)及关节软骨病理学的影响。

1 实验材料

健康的新西兰大白兔38只,体质量(2.25±0.25) kg，由长春生物制品研究所提供。所有大白兔均喂养在恒温、恒湿的清洁环境中，环境温度(25±1) ℃，湿度为70%，任意进食标准饲料和饮水。仙灵骨葆胶囊(由淫羊藿、续断、补骨脂、地黄、丹参、知母等主要成分组成，500 mg/粒，贵州同济堂制药有限公司，国药准字Z20025337)。增液润节汤(杜仲15 g，刺五加15 g，威灵仙15 g， 莶草20 g，山茱萸20 g，当归15 g，鸡血藤15 g)。试剂盒(血清SOD、关节液中IL-1):由上海博升生物科技有限公司提供。

2 实验方法

将38只大白兔随机正常对照组(A组)、模型组(B组)、仙灵骨葆胶囊组(C组)、增液润节汤治疗组(D组)，其中正常组8只,其余各组每组10只。除正常组外，其余3组均按照日本鬼头康炎[6]的方法造模，造模1周后在B组中随机抽取2只大白兔，取右膝关节做HE染色，观察关节软骨变化以证明造模成功。造模成功后各组动物抽取耳背动脉血2 mL及关节液20 μL备用，同时予以各组灌胃(C组：仙灵骨葆胶囊75 mg/(kg·d)，D组:增液润节汤10 mL，A、B组分别灌等量的生理盐水，每天2次)，连续8周，每天观察一般状态(精神状态、体毛色泽、四肢活动、体质量变化等)。8周后各组动物均以栓塞法处死，取关节软骨行组织学观察(评分标准见表1)及采用放射性免疫吸附法检测血清SOD(U/L)和关节液IL-1(ng/mL)的含量,结果进行统计学分析处理。

注：根据相关文献的参考[7-8]，按体表面积换算与人给药的等效剂量。

3 结果

3.1 一般状态 实验过程中,A组兔子体质量明显增加，精神状态良好，反应灵敏，动作敏捷，毛色白而光泽，二便正常，无1只死亡。B组兔子体毛干而无泽、饮食减少、自发活动明显减少,关节活动不利， 其中1只死亡。治疗组也出现类似表现，但治疗后程度较轻，情况基本与A组相同。在喂药过程中，C组死亡1只，D组死亡2只。

表1 关节软骨组织病理学评分标准

3.2 治疗前后各组血清SOD及各组关节液IL-1的含量的比较 见表2。

表2 治疗前后各组血清SOD、关节液IL-1的含量

注：与A组比较，#P<0.05;与治疗前比较，△P<0.05

3.3 关节软骨组织学观察(HE染色) A组:软骨表面光滑、完整，四层结构清晰可辨，潮线清晰完整。软骨细胞数量、形态、大小正常，排列整齐有序。B组:软骨表面不完整、变薄，软骨细胞明显减少，部分可见簇状增生、肿胀，或见损伤、糜烂。C组:软骨变薄，表层不连续，软骨细胞略肿胀，排列轻度紊乱。部分可见局部缺损，偶可见细胞簇状增生肿胀。D组:软骨厚度正常，细胞排列轻度紊乱，软骨表面轻度糜烂，局部无明显的缺损，偶可见细胞簇状增生肿胀。

表3 各组病理评分(均数±标准差)

注：与A组比较，#P<0.05;与B组比较，△P<0.05

4 讨论

膝骨关节炎的发病与肝肾二脏关系最为密切[9-10]。因软骨无血管，营养的供应需从关节液中摄取，而肝肾亏虚则关节液亦减少，从而难以濡养软骨而使软骨变性或糜烂。鉴于以上观点，经过长期的临床研究，自创了增液润节汤，此方具有滋阴养血、活血通络之功效。

结果表明,增液润节汤通过激活SOD的活性而使其含量显著升高，催化氧自由基发生歧化反应，阻止过多氧自由基对关节软骨的损害，保护关节软骨，提高软骨细胞功能，促进软骨修复，延缓软骨的退变。同时，增液润节汤可减低关节液IL-1水平,说明增液润节汤在一定程度上可减轻炎症对关节软骨的破坏及所产生的疼痛。另外，增液润节汤还具有活血化瘀通络的功效，其可能通过改善骨内微循环，降低骨内高压，以减轻骨内高压对软骨的损害。

[1]陈瑞莲.中医综合疗法治疗膝骨关节炎临床观察[J].中医药临床杂志,2011,23(5):427-428.

[2]施桂英.关节炎概要[M].北京:中国医药科技出版社,2000:339.

[3]袁长深,段戡.从痰瘀论治骨性关节炎[J].辽宁中医药大学学报,2008,10(6):54-55.

[4]杨平林,刘德玉,贺西京,等.补肾活血中药对膝骨性关节炎家兔血清、滑膜及关节软骨一氧化氮水平的影响[J].中国骨伤,2003,16(11):667-669.

[5]姚啸生,李洪久,宋雅梅,等.加味补肾壮筋汤对膝骨关节炎氧自由基代谢的影响[J].中医正骨,2005,17(9):5-6.

[6]杨峰,史宗道.用木瓜蛋白酶建立兔颞颌关节骨关节炎模型的研究[J].华西口腔医学杂志,2002,20(5):330-332.

[7]邓宇,伍筱梅,任医民,等.关节腔内注射不同蛋白酶建立兔膝骨关节炎模型的对比研究[J].中华关节外科杂志(电子版),2009,3(3):332-339.

[8]章元沛.药理实验学[M].2版.北京:人民卫生出版社,1996:238.

[9]彭金坡,刘红雨.骨关节炎的中医研究进展[J].中国医学创新,2011,8(30):151-152.

[10]丁和义.独活寄生汤加减治疗膝骨关节炎36例临床观察[J].中国实用医药,2011,6(10):147-148.