王 微,马立斌,尚云龙,董燕飞,李洪禹,葛学萍,孟令玉,韩泽华,王冰梅*

(1.长春中医药大学基础医学院生理教研室，长春 130117；2.长春中医药大学临床医学院，长春 130117；3.长春中医药大学药学院，长春 130117)

本实验通过制备益气解毒中药复方含药血清，研究其体外抗小鼠肝癌H22细胞生长的作用。

1 实验材料

小鼠肝癌H-22细胞株,购自吉林省肿瘤研究所。SD大鼠，由吉林大学实验动物中心提供。益气解毒方由我校附属医院临床验方加减而成：黄芪、当归、丹参、鳖甲、菊花、半枝莲等，经过水煎醇沉处理，制成浓度1.25 g生药/mL的药液备用。化疗阳性药：5-氟尿嘧啶(5-FU)由上海旭东海普药业有限公司生产。标准胎牛血清(Fetal Serum Bovine，FBS)，Hyclone公司产品；RPMI-1640完全培养基干粉：美国Gibco公司产品；3-(4，5-二甲基噻唑-2)-(2，5)-二苯基四氮唑溴盐(噻唑蓝,MTT):美国Sigma公司产品；二甲基亚砜(Dimethyl Sulfoxide DMSO)：Amresco公司产品；台盼蓝，青霉素，链霉素。其他常规化学试剂均为进口或国产分析纯产品。二氧化碳培养箱，Heraeus Hera Cell-150型，德国；研究用倒置显微镜，OLIMPUS IX-70，日本；全自动酶标仪，Bio-Rad680型，美国；超净工作台，苏州净化设备厂；低速离心机，上海飞鸽。

2 实验方法

2.1 细胞培养 小鼠肝癌H22细胞以台盼蓝计数法显微镜下计数，加入含10%FBS的RPMI-1640培养液，调整细胞数为5×105/mL接种于培养瓶中。置二氧化碳培养箱内(5%CO2，37 ℃)中静置培养，待培养液变为橙色时更换培养基，以1 000 r/min速度离心5 min，弃上清，再以RPMI-1640培养液重悬细胞，继续培养。待细胞生长至数量较多时，离心后，分瓶培养，传代。

2.2 大鼠含药血清的制备 取健康大鼠10只，雌雄不限，体质量180～220 g。每天禁食10～12 h后，按“人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值表”[1]，人与大鼠的等效剂量比值56.0换算，每日应以1.25 g生药/mL的浓度按10 mL/kg体质量的剂量灌胃给予中药提取液益气解毒方。……