罗 东,张家衡，柯有力

(武汉市中西医结合医院 胸心外科，武汉 430022)

缺血再灌注后出现的肺急性损伤是肺动脉成形、体外循环等手术术后患者肺功能障碍的重要原因之一[1]。急性肺损伤(ALI)一般认为多属中医“暴喘”“喘脱”等病证范围[2]。本实验通过在体兔肺缺血再灌注动物模型,观察防己黄芪汤对肺缺血再灌注损伤(Lung ischaemia-reperfusion Injury，LIRI)的保护作用，并探讨其可能的作用机制。

1 实验材料

健康成年日本大耳白兔30只，雌雄不拘，体质量(2.5±0.5) kg,购于武汉市生物制品研究所动物实验中心。DW2000型动物人工呼吸机(上海嘉鹏科技有限公司)；防己黄芪汤组成为：防己12 g，黄芪15 g，白术9 g，甘草6 g，使用中药颗粒冲泡成水性药液，每毫升药液含生药1 g，中药颗粒由江苏江阴药品有限公司生产；超氧化物歧化酶(SOD)(批号：20120606)试剂盒购自南京建成生物工程研究所；伊文思兰(EB，Fluka公司)；二甲基甲酰胺(广东汕头西陇化工厂)。

2 实验方法

2.1 动物分组和处理 30只日本大耳白兔随机分为3组(每组10只)。防己黄芪汤组,于术前连续7 d灌服防己黄芪汤，2 mL/(kg·d)，对照组及假手术组术前不作干预。建立肺缺血再灌注损伤模型：实验动物称重，经耳缘静脉注射25%乌拉坦(4 mL/kg)麻醉，术中以0.8 mL/kg间断给药维持。颈正中切开，游离气管，在气管正中做T型切口,气管插管、固定，连接动物呼吸机给予机械通气，呼吸频率30次/min，吸呼比1∶1，氧浓度100%，潮气量10 mL/kg。胸骨旁线纵行切开左胸，切断左下肺韧带，游离左肺，由肺门后方绕过阻断带，备阻断肺门用。肝素350 U/kg肝素化。实验动物随机分3组(n=10):防己黄芪汤组术中于呼气末时用阻断器阻断左肺门造成左肺缺血1 h后开放阻断器，左肺恢复灌注并复张后观察3 h；对照组，阻断左肺门1 h后开放阻断器，左肺恢复灌注并复张后观察3 h；假手术组，开胸后仅游离左肺门并套带，不阻断肺门，观察4 h。

2.2 检测指标 1)肺含水量测定：防己黄芪汤组和对照组在缺血1 h、再灌注3 h，假手术组在开胸4 h，于近肺门处结扎并切取部分左肺下叶肺组织，计算肺含水量:肺组织称湿重，80 ℃干燥箱中烘干24 h后称干重，通过公式算出肺含水量。肺含水量=(湿重-干重)/湿重×100%;2)组织学观察：上述方法取部分左肺下叶组织，10%甲醛溶液固定，常规脱水、石蜡包埋、制成切片、HE染色，光镜下观察肺组织结构破坏、肺间质水肿及炎性细胞浸润程度；3)SOD含量测定：余下左肺组织冻存，按试剂盒说明测定SOD含量；4)肺血管通透性比较：EB法检测肺毛细血管通透性。各组按2 mL/Kg经股静脉注射2%EB，1 h后取左肺上叶比较肺血管通透性差异：取左肺上叶肺组织约300 mg，吸干血液，按每100 mg湿重组织用1 mL甲酰胺的比例浸泡、置入37 ℃水浴中24 h，5 000 r/min抽提离心后，于波长620 nm处测吸光度，计算出伊文思兰含量(μg/g)。

3 实验结果

3.1 肺含水量测定 防己黄芪汤组和对照组左肺含水量均显著高于假手术组(P<0.05)，防己黄芪汤组肺含水量则明显低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05,见表1)。

3.2 肺血管通透性比较 防己黄芪汤组和对照组左肺组织中伊文思兰含量明显高于假手术组(P<0.05)，而防己黄芪汤组肺组织中伊文思兰含量明显低于对照组(P<0.05,见表1)。

3.3 肺组织中SOD含量检测 防己黄芪汤组和假手术组中SOD含量均明显高于对照组(P<0.05)，且防己黄芪汤组SOD含量高于假手术组，差异有统计学意义(P<0.05，见表1)。

组 别含水量/%伊文思兰含量/(μg/g)SOD/(NU/mL)对照组 89.52±0.36△ 182.6±17.7△ 94.32± 9.96△ 假手术组 75.57±0.22 113.8±11.5 113.52±11.23 防己黄芪组81.89±0.27#△129.3±13.1#△126.34±12.56#△

注：与对照组比较，#P<0.05，与假手术组比较，△P<0.05

3.4 肺组织学观察 对照组缺血1 h、再灌注3 h后，动物左肺可见肺血管扩张充血，肺间质水肿，肺泡腔内有浆液性渗出，并有大量红细胞漏出，中性粒细胞浸润明显。防己黄芪汤组动物左肺损伤很轻，肺泡结构完整，肺水肿程度较对照组明显减轻，肺泡腔内仅有少量红细胞漏出，中性粒细胞浸润很少。假手术组动物左肺组织无破坏征象，肺泡壁完整，肺间质无水肿，无中性粒细胞浸润。

4 讨论

缺血再灌注可导致组织内有氧自由基(OFR)大量生成，激活及释放多种炎性介质可使肺脂质过氧化增强，引起微血管损伤、通透性增高，细胞间质水肿，ATP酶活性受损,是引起患者呼吸功能下降的主要原因[3]。李玉梅等[4]对大鼠肺损伤研究过程中证实炎性介质直接参与了肺损伤。本研究在建立兔肺缺血再灌注动物模型的基础上发现对照组兔肺组织经历缺血再灌注后与假手术组相比可见肺血管扩张充血，中性粒细胞浸润，肺泡腔内有大量浆液性渗出及红细胞漏出，表明发生了严重的肺水肿。寻找抑制氧自由基生成、减轻肺水肿等改善缺血再灌注后肺功能的方法是目前亟待解决的难题。

陈建真等[5]认为黄芪对血管内皮细胞通透性增加有改善作用，并有清除氧自由基作用。高妮娜等[6]认为黄芪具有免疫增强和免疫抑制的双向调节作用。白玉新等[7]认为黄芪有减轻脂质过氧化、清除自由基、增强ATP酶活性、抑制肿瘤坏死因子-α等作用。王迪等[8]通过研究黄芪组方对小鼠免疫功能的影响，证实黄芪在提高淋巴细胞转化率和TNF活性方面起主导作用。有学者[9]认为，黄芪、白术、甘草组方可补益脾肺之气，增强肺组织ATP酶活性。黄芪是防己黄芪汤重要成分，SOD是体内重要的抗氧化酶，它可对抗与阻断氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原氧自由基造成的细胞伤害。本研究观察到,肺缺血再灌注损伤后对照组SOD含量明显减少，防己黄芪汤组SOD含量明显高于对照组及假手术组。其结果提示中药防己黄芪汤可提高体内抗氧化酶系统的活性，增加清除氧自由基的能力，减轻肺缺血再灌注损伤的程度。

陈 等[10]研究表明，在方剂瓜蒌薤白半夏汤中加黄芪以补气行气，能对抗氧化低密度脂蛋白对血管内皮细胞生长的抑制作用。本研究结果发现与对照组相比，防己黄芪汤组动物肺泡结构完整，肺泡腔内仅有少量红细胞漏出，肺水肿程度明显减轻。肺含水量测定结果也证实防己黄芪汤具有减轻肺缺血再灌注后肺水肿的作用。肺组织中伊文思兰含量测定亦提示防己黄芪汤组肺血管通透性得到了明显的改善，也印证了黄芪对微血管内皮细胞的保护作用。

中医理论认为，手术时耗伤元气，肺失宣肃，津液不布，聚液为痰。治疗时应以补益肺气、止咳化痰为法。防己黄芪汤是益气利水的代表方，出自《金匮要略》，原文：“风湿脉浮，身重汗出恶风者，防己黄芪汤主之。”组方有防己、黄芪、白术、甘草等，防己祛风湿利小便；黄芪益气固表扶正以祛风湿之邪；白术健脾益气，利水燥湿；甘草调和营卫，诸药合用，扶正祛邪，祛风除湿，故宜于气虚挟湿的病症。防己黄芪汤功能益气祛风、健脾利水，治疗卫气不固，外受风邪而致的风水、风湿证。其配伍特点是益气与利水并行，标本兼顾，重在固本，体现了消补兼施之法。

[1]胡克俭,叶磊,姜桢,等.体外循环中急性肺水肿分析[J].上海生物医学工程,2002,23(1):6-7,10.

[2]耿耘,魏星.急性呼吸窘迫综合征的中医发病机理探讨[J].江西中医药,2002,33(5):11-12.

[3]Van D,Kluin J,Haitsma J J,et al.Ischemia of the lung causes extensive long-term pulmonary injury:an experimen-tal study[J].Respiratory Research,2008,9(1):28.

[4]李玉梅,戴春来,周文莉,等.高氧肺损伤肺组织中IL-8和IL-10含量的变化及意义[J].吉林大学学报:医学版,2010,36(5):918-921.

[5]陈建真,吕圭源,叶磊,等.黄芪黄酮的化学成分与药理作用研究进展[J].医药导报,2009,28(10):1314-1316.

[6]高妮娜,李丽.黄芪调节免疫功能的应用研究[J].长春中医药大学学报,2008,24(6):671.

[7]白玉新,傅亮,高进.黄芪对缺血性急性肾功能衰竭的保护作用[J].中国实验方剂学杂志,2009,15(7):74-76.

[8]王迪,张文风,张杰.黄芪配甘草对小鼠细胞免疫功能的影响[J].长春中医药大学学报,2006,22(3):42-43.

[9]梁启军,李存霞,王鹏.益气温阳活血汤对肺心病初期家兔模型肺组织ATP酶的影响[J].吉林中医药,2010,30(7):628-630.

[10]陈 ,郜俊清,金惠根,等.补气化痰方对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤的保护作用[J].吉林中医药,2013,33(6):612-614.