高晓晨，刘 冬，白俊武，于江波，赵娜娜，宗 颖，崔丽娜，张 辉*，孙佳明*

(1.长春中医药大学，长春 130117;2.吉林敖东延边药业股份有限公司，吉林 敦化 133700)

哈蟆油(Ranaeoviductus)为我国常用中药材，具有补肾益精，养阴润肺的作用。据《中国药典》2010年版1部记载其来源为蛙科动物中国林蛙(RanatemporariachensinensisDavid)雌蛙的输卵管，经采制干燥而得[1]。中国林蛙是中国东北长白山特有的珍稀野生动物。分布于辽宁、吉林、黑龙江、内蒙古、甘肃、河北、山东、山西、陕西、河南、青海、四川等地[2]。黑龙江林蛙，主要分布于黑龙江、吉林、辽宁等省[2]。目前，哈蟆油基原物种的鉴定方法主要为依据理化性状、显微特征等传统鉴别方法[3]。但这些方法主要以形态学为基础，不仅受到遗传因素的影响，而且与中国林蛙的生长环境、生长发育阶段有密切的关系。在鉴别过程中稳定性较差，影响鉴定结果[4]。可见，传统的形态学及理化性质鉴定难度大，现需要一种准确有效的方法来鉴定。 DNA条形码(DNA Barcoding)是利用基因组中一段公认标准短序列来进行物种鉴定的分子诊断新技术[5]，由加拿大动物学家Hebert等[6]首次提出。近年来该技术在物种鉴定方面有广泛的应用和迅速的发展，并且DNA条形码技术简便高效,不受样品的形态性状以及研究者的专业水平限制，可有效的鉴定中药材[7]。本研究对哈蟆油基原物种进行COI序列研究，分析其药材的物种变异,建立哈蟆油基原物种DNA分子鉴定方法,为其鉴定提供有效的手段。

1 材料与方法

1.1 材料 共收集样本12份，经长春中医药大学张辉教授鉴定为中国林蛙和黑龙江林蛙。……