程鸿锟

(天津市红桥区中医医院，天津 300132)

HPLC法测定单硝酸异山梨酯滴丸含量的不确定度分析*

程鸿锟

(天津市红桥区中医医院，天津 300132)

目的：对HPLC法测定单硝酸异山梨酯滴丸含量的不确定度进行评定分析，找出影响不确定度的因素。方法：通过建立数学模型，对所得实验数据进行分析和处理，确定并简化不确定度来源，量化不确定度分量，计算相对标准不确定度扩展不确定度。结果：扩展不确定度为1.88%(K=2)，置信概率为95%。结论：本方法可用于该制剂含量的不确定度分析。

HPLC，不确定度分析，单硝酸异山梨酯滴丸

测量不确定度是一组与测量结果相关联的参数， 检测实验室应建立测量不确定度的分析评定程序，并有能力对每一项有数值要求的测量结果进行测量不确定度的分析与评定。为了使测量数据更准确、客观，根据中国实验室国家认可委员会对认可实验室在测量不确定度方面的要求，通过对高效液相法测定单硝酸异山梨酯滴丸含量的不确定度进行测量的分析与评估，进而找出影响不确定度的因素，为评价检测报告提供科学依据。

1 仪器与试药

岛津LC-2010C高效液相色谱仪； LC solution工作站；色谱柱:迪马C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；赛多利斯BP211D电子天平(德国，十万分之一)；单硝酸异山梨酯对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号100694-200401)；单硝酸异山梨酯滴丸(天津美伦医药集团，规格：5 mg，批号810040)；乙腈为色谱纯，水为纯化水,其他试剂均为分析纯。

2 实验方法

2.1色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(18∶82)为流动相；检测波长：230 nm；柱温：40 ℃；流速：1.0 ml/min；进样量：20 μl。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液制备 精密称取单硝酸异山梨酯对照品①10.92 mg、②12.00 mg，分别置于200 ml量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.2.2供试品溶液制备 取本品20丸，精密称定，研细，精密称取适量,分别置100 ml量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解并稀释至刻度，摇匀。

3 不确定度的分析与评定[1]

测量不确定度评定步骤：找出所有影响不确定度的影响因子；建立能够满足不确定度评定所需的数学模型；分析并计算各影响因子的标准不确定度分量；将各标准不确定度合成得到合成标准不确定度；计算扩展不确定度；给出测量不确定度报告。

3.1识别不确定度来源 主要包括供试品和对照品峰面积的响应值、对照品与供试品的称量与稀释、对照品纯度、供试品含量均匀度的差异等。

3.2建立数学模型

3.3分析并计算不确定度分量

3.3.1由对照品引入的相对标准不确定度urel(S)

=3.1×10-2。

=9.5×10-2；

200 ml量瓶引入的相对标准不确定度为urel(SV)=9.5×10-2/200=4.8×10-4。

3.3.1.5对照品溶液峰面积引入的不确定度urel(SA) 该不确定度的产生主要由重复进样所引起，由仪器给出的进样峰面积标准偏差为随机测量，属于A类不确定度。2份对照品分别进样5次和2次，用极差法分别计算其标准不确定度，重复测量的峰面积平均值R1为292 499和R2为321 287，极差R1为1 119，R2为29，当n=5时极差系数C1=2.33，则标准不确定度u(SA1)=R1/C1=1 119/2.33=480；当n=2时极差系数C2=1.13，则标准不确定度u(SA2)=R2/C2=29/1.13=26；则相对标准不确定度

=1.6×10-3。

合并以上各分量，则对照品引入的相对标准不确定度

3.3.2供试品引入的相对标准不确定度urel(T)

3.3.2.1供试品称量引入的相对标准不确定度urel(Tm) 主要有供试品称样量和平均丸重。根据“3.3.1.1”所述um=3.1×10-2。供试品称样2份，分别为42.04和41.33 mg，则供试品称样的相对标准不确定度为

3.3.2.2供试品稀释引入的相对标准不确定度urel(TV) 同“3.3.1.4”项下方法求得其标准不确定度为u(SV)=5.5×10-2，则100 ml量瓶引入的相对标准不确定度为urel(TV)=5.5×10-2/100=5.5×10-4。

3.3.3供试品含量均匀度引入的不确定度urel(t)

3.3.3.1供试品稀释引入的相对标准不确定度urel(fV) 同“3.3.2.2”，则urel(fV)=5.5×10-4。

=8.1×10-3

3.4计算合成相对标准不确定度urel(P) 供试品含量测定结果P为101.64%，urel(P)由对照品引入的不确定度urel(S)和供试品引入的不确定度urel(T)以及供试品的含量均匀度引入的不确定度urel(f)所构成，故

3.5计算扩展不确定度(U) 按95%置信概率，取包含因子k=2，则U95=0.94%×2=1.88%。

3.6测量不确定度报告 本次实验单硝酸异山梨酯滴丸的含量为：(101.64±1.88)%。

4 讨论

从以上数据可以看出，供试品的含量均匀度产生的不确定度所占比重较大，其次为对照品称量，在计算中加入含量均匀度系数f，其作用是将样品本身含量的不均匀性所产生的不确定度带入公式，而与计算结果无关，故设其值为1。因此，在实际操作中，我们应将供试品充分研匀，以保证取样的均匀性，还可适当加大对照品的称样量来减少由此带来的不确定度。本次实验数学模型合理，结果可靠，可为同类方法测量不确定度评定提供一种参考思路和模式。

1 曹立全.注射用头孢地嗪钠含量测定的不确定度分析[J].天津药学，2011，23(1)：9-10

2 中国合格评定国家认可委员会.CNASGL06化学分析中不确定度的评估指南[M].北京:中国计量出版社，2007：7-8

2013-12-24

R927.11

A

1006-5687(2014)04-0004-03