李璐 李婷 李沐 吴炎 齐琳 崔东明 胡薇

(吉林农业大学，长春，130118)

MiRNA-93-5p对VEGF的转录调控及其与梅花鹿茸细胞增殖的关系1)

李璐 李婷 李沐 吴炎 齐琳 崔东明 胡薇

(吉林农业大学，长春，130118)

为了探讨miRNA-93-5p对梅花鹿血管内皮生长因子(VEGF)的转录调控作用及其与鹿茸细胞生长的关系，分离了鹿茸顶端软骨组织细胞，利用Trizol试剂法提取细胞总RNA，反转录合成cDNA。根据GenBank已发表的相关序列设计梅花鹿VEGF基因的3′端非编码区部分序列(3′UTR)特异引物并进行克隆，构建VEGF基因的3′UTR野生型及其突变体序列双荧光素酶报告基因载体并进行荧光素酶活性检测。再将人工合成的miRNA-93-5p模拟物转染鹿茸软骨细胞，MTT法检测鹿茸细胞体外增殖的变化；Western blotting分析VEGF蛋白的表达丰度。结果表明：成功获得了鹿茸组织VEGF基因的3′UTR序列，野生型序列长度为356 bp，突变体长度为336 bp。荧光素酶活性检测结果表明，转染野生型质粒组细胞荧光素酶活性降低，而转染突变体组细胞荧光素酶活性无明显变化。MTT法和Western blotting结果显示，鹿茸细胞的体外增殖受到抑制，VEGF蛋白的表达水平下降，且呈时间依赖性。

鹿茸细胞；miRNA-93-5p；血管内皮生长因子；转录调控；细胞增殖

鹿茸是雄鹿顶部未骨化且密生茸毛的幼角，每年周期性的脱落与再生，是哺乳动物中唯一可以完全再生的器官。鹿茸生长速度极快，在快速生长期可达到12.5 mm/d[1-2]。新生的鹿茸中具有极其丰富的血管，随着鹿茸的生长，血管也迅速延伸，以提供鹿茸生长时所需的营养物质[3-4]。血管内皮生长因子(VEGF)是一种具有高度生物学活性的功能性糖蛋白，可以使皮肤血管的通透性明显增加[5]。……